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shwkx1987新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
求救啊！請(qǐng)高手診斷病因所在，關(guān)乎實(shí)驗(yàn)生死.（免疫熒光技術(shù)）
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各位姐妹、兄弟： 小弟這學(xué)期做免疫熒光，到現(xiàn)在了一直做不出漂亮的片子，實(shí)在沒(méi)招了，快急死了�，F(xiàn)在向各位求救。我把我的過(guò)程和結(jié)果附上（染中等纖維），還請(qǐng)各位賜教啊。 實(shí)驗(yàn)步驟： 1、用pH8.0的PBS浸泡細(xì)胞爬片，5min/3次 2、用預(yù)冷的甲醇，在-20度固定10min 3、用pH8.0的PBS浸泡細(xì)胞爬片，5min/3次 4、室溫封閉1h。封閉液：0.5%山羊血清、0.3%tritonX-100 5、加一抗，4度過(guò)夜 6、用pH8.0的PBS浸泡細(xì)胞爬片，5min/3次 7、暗處加二抗，染色2h 抗體稀釋液：pbs、0.1%BSA、0.3%tritonX-100. 所有用的試劑配方都是按抗體說(shuō)明書(shū)配置 [ Last edited by amisking on 2011-12-2 at 19:47 ] |
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 免疫實(shí)驗(yàn) |
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kaobo2012
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
yqbter: 金幣+3, 感謝分享！ 2012-05-30 08:12:51
yqbter: 金幣+3, 感謝分享！ 2012-05-30 08:12:51
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我最近也在做免疫熒光，感覺(jué)你的方法比我的少了幾步。 1 我用的固定液是4%多聚甲醛，并且固定30分鐘后，60度烤片過(guò)夜，或6個(gè)小時(shí)。 2 我還有抗原修復(fù)的過(guò)程，你可以修復(fù)下。 3我是封閉半個(gè)小時(shí)。 4 二抗我也是半個(gè)小時(shí)。 5 如果你有條件，最好用DAPI染下細(xì)胞核。更容易觀察。 6 你用什么封片？最好用配制的緩沖液封片，否則易淬滅。 希望對(duì)樓主有幫助。 |
2樓2011-12-02 21:30:33
shwkx1987
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3樓2011-12-03 13:43:26
kaobo2012
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4樓2011-12-03 15:57:32
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5樓2011-12-06 18:17:14
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8樓2012-09-09 16:18:18
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