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long楊銅蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
請(qǐng)幫忙鑒定一下RNA圖是怎么回事 已有9人參與
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提取的植物總RNA，1 2 重復(fù) 1 最上面的一條帶是不是基因組DNA？ 2 如何消除DNA的污染？ 3 RNA提取質(zhì)量您覺(jué)得怎樣？ 謝謝 ！ RNA電泳 DL2000 |
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小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
wanhscn(金幣+3): 熱心！ 2011-12-20 20:00:45
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
wanhscn(金幣+3): 熱心！ 2011-12-20 20:00:45
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1.靠點(diǎn)樣孔最上面的是gDNA污染。生工植物RNA kit里沒(méi)有DNase I 消化的步驟，所以提出來(lái)RNA里有DNA污染屬于正�，F(xiàn)象。而DNA是雙鏈，在量少的情況下也可以染色染得很亮，會(huì)讓人感覺(jué)DNA量很多。 2.有很多公司都有DNase I（RNase free） 這個(gè)東西，專(zhuān)門(mén)用來(lái)消化RNA里的DNA污染。如ambion， Qiagen, omega等。如果你后續(xù)實(shí)驗(yàn)對(duì)這個(gè)gDNA敏感則應(yīng)該去除DNA。不過(guò)去DNA的時(shí)候要謹(jǐn)慎處理，否則容易造成RNA降解。 3.RNA的質(zhì)量挺好的（如沒(méi)有DNA更好），至于28s是否有比18s亮一倍，跟上樣量也有關(guān)系，并不是所有上樣量都能看出很明顯的2：1比例。 其實(shí)一般跑普通的瓊脂糖凝膠電泳也就是使用DNA marker，稍為檢測(cè)一下，不用那么介意跑RNA電泳必須使用RNA marker。如果不嫌麻煩且要求高一些，可以跑變性膠，甚至使用Agilent（RNA 6000 Nano kit）檢測(cè)一下RNA的完整性。 |
9樓2011-12-15 11:04:26
joan198108
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小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
西瓜(金幣+2): Good! 2011-12-13 18:59:45
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
西瓜(金幣+2): Good! 2011-12-13 18:59:45
| 最上面的可能是DNA污染，但是按常理來(lái)說(shuō)不應(yīng)該有那么高的亮度，是不是操作過(guò)程有什么不規(guī)范的地方，回查一下。我們提取的RNA通常會(huì)經(jīng)過(guò)DNase（RNase free）的處理。一般來(lái)說(shuō)RNA電泳條帶應(yīng)該是三條（植物由于葉綠體的存在可能多余三條），并且有亮度差異，而你的僅有兩條且亮度一樣。還有就是感覺(jué)你的MARKER是不是用的DNA的，感覺(jué)不太正常。 |
2樓2011-12-13 17:48:27
shaquila
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3樓2011-12-13 18:18:26
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5樓2011-12-14 07:22:27
dingxiuying
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7樓2011-12-14 15:33:51
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8樓2011-12-15 10:35:34
10樓2011-12-15 11:19:12
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