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grape114金蟲 (正式寫手)
Biosimilars
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[求助]
關(guān)于Q Sepharose® Fast Flow 陰離子交換柱掛柱問題
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| 我現(xiàn)在也用QFF分離蛋白，用的0.02m的NaOH和甘氨酸做緩沖液，調(diào)成PH10.0但是我的蛋白掛不上柱子，我蛋白的PI是8.6左右，想提高緩沖液的PH值，但是怕太高我的蛋白變性，想問下PH值最高能調(diào)成多少呢。謝謝 |
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lihuan0525
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4樓2011-12-15 16:29:12
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★
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amisking(金幣+4, BioEPI+1): 鼓勵積極應(yīng)助！ 2011-12-15 20:01:57
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兩種選擇： 1、繼續(xù)用你的QFF，換buffer，如10mM的磷酸，pH7.0，收集穿透峰，同樣可以達(dá)到除雜的目的，內(nèi)毒素、DNA、HCP等雜質(zhì)吸附到Q柱上，而目的蛋白穿透，純化結(jié)束后CIP清洗即可將柱子還原到使用前的狀態(tài)； 2、用SP陽離子柱，buffer pH7.0，目的蛋白吸附到柱子上，雜質(zhì)穿透，增加鹽濃度洗脫目的蛋白即可。 |
5樓2011-12-15 16:30:22
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