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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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piaoyunokok

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[交流] 有關(guān)基因敲除

在一個(gè)載體上有形如A-B-A式的基因，將B插入A中，在酶切驗(yàn)證電泳圖中，應(yīng)該有那些信息��？用什么作對(duì)照？不知道我說(shuō)明白了沒有，嘻嘻。

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1樓 2011-12-16 19:39:33

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果子么么茶

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感覺表達(dá)不是很明白將B基因插入到載體上A基因的特定位點(diǎn)么？不過(guò)對(duì)照的話插入前的空載體酶切做對(duì)照

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2樓2011-12-16 23:03:53

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piaoyunokok

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樓: Originally posted by 果子么么茶 at 2011-12-16 23:03:53:
感覺表達(dá)不是很明白將B基因插入到載體上A基因的特定位點(diǎn)么？不過(guò)對(duì)照的話插入前的空載體酶切做對(duì)照

是特定的位點(diǎn)。而且這個(gè)位點(diǎn)也是通過(guò)酶切而得的。所以不能用你說(shuō)的那個(gè)作對(duì)照吧？

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3樓2011-12-16 23:56:32

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thetc

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西瓜(金幣+1): 鼓勵(lì)下 2011-12-17 12:39:53

B基因上有你所用的酶的酶切位點(diǎn)嗎？如果沒有的話你在做融合基因的酶切后電泳的話比較于原來(lái)未能融合的基因來(lái)說(shuō) 條帶會(huì)不一樣，融合基因的條帶會(huì)長(zhǎng)上一些，未融合的應(yīng)該是短的。

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4樓2011-12-17 00:10:20

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樓: Originally posted by thetc at 2011-12-17 00:10:20:
B基因上有你所用的酶的酶切位點(diǎn)嗎？如果沒有的話你在做融合基因的酶切后電泳的話比較于原來(lái)未能融合的基因來(lái)說(shuō) 條帶會(huì)不一樣，融合基因的條帶會(huì)長(zhǎng)上一些，未融合的應(yīng)該是短的。

有的。兩個(gè)基因用同樣的酶進(jìn)行酶切的。不然也沒辦法連上吧？還有其他的高見嗎？呵呵

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5樓2011-12-17 00:16:36

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yguang

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簡(jiǎn)單的如酶切，PCR（設(shè)計(jì)各種引物），復(fù)雜的如southern雜交等，想驗(yàn)證這樣的實(shí)在太多方法了！

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6樓2011-12-17 05:51:04

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shaquila

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西瓜(金幣+1): 鼓勵(lì) 2011-12-17 12:40:04

可以測(cè)序部份插入序列，也不貴就兩個(gè)反應(yīng)，五十大洋

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7樓2011-12-17 06:45:56

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西瓜

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piaoyunokok(金幣+1): 多謝啦 2011-12-19 21:47:21

做酶切，根據(jù)切出來(lái)的條帶數(shù)目和大小判斷。
找個(gè)在A和B上面都有的酶切位點(diǎn)，做個(gè)單酶切。
沒有合適的位點(diǎn)的話，就做個(gè)雙酶切，一個(gè)位點(diǎn)在A上，一個(gè)在B上。

最好不要用克隆時(shí)的位點(diǎn)，會(huì)有假陽(yáng)性。

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8樓2011-12-17 12:42:22

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