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達(dá)菲鴨

新蟲(chóng) (初入文壇)

應(yīng)助: 1 (幼兒園)
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散金: 10
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在線: 10.3小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 994644
注冊(cè): 2010-04-12
專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)

[求助] 與別的菌相比，弧菌做PFGE時(shí)，為什么要加一種酶（NotⅠ或SfilⅠ）

老板讓我做弧菌的PFGE（脈沖場(chǎng)凝膠電泳），我便查了一些相關(guān)的protocol。與之前師姐做過(guò)的沙門菌的PFGE相比，網(wǎng)上給出的弧菌的plug制作步驟里，多了一步限制性酶切，一般都是NotⅠ或SfilⅠ。從總體上看，我?guī)熃阒白龅膒lug步驟簡(jiǎn)單多了。雖然照著protocol做也可以，但我還是很想了解一下為什么。

BTW，網(wǎng)上說(shuō)加入限制酶是為了比較不同菌的restriction sites的圖譜，從而判斷細(xì)菌的基因相關(guān)性�？晌业倪@個(gè)實(shí)驗(yàn)不需要比較呀，而且我?guī)熃阒白龅纳抽T也沒(méi)加任何限制性內(nèi)切酶，這也是我比較confused的原因之一。

拜托各位大俠相助呀！先謝謝啦

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1樓 2011-12-22 10:33:41

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guoyanbiao

銅蟲(chóng) (小有名氣)

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專業(yè): 微生物學(xué)

【答案】應(yīng)助回帖

樓主，脈沖場(chǎng)凝膠電泳可以分離出2.3M ，1.8M以及2M之間的基因組條帶嗎？
是這樣的，我的目的菌種含有無(wú)法分離的雜菌，我想通過(guò)脈沖場(chǎng)凝膠電泳，能分離開(kāi)2.3M ，1.8M以及2M之間的基因組條帶嗎？我想通過(guò)脈沖場(chǎng)凝膠電泳，電泳前不酶切，分離開(kāi)雜菌的基因組，切回目的基因的膠回收，做16S鑒定

贊一下

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survive and succeed!!!!!!!!

3樓2013-04-18 16:59:25

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