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498243829金蟲 (初入文壇)
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[求助]
凝血酶失活問(wèn)題
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凝血酶最佳失活條件？凝血酶與適配體結(jié)合的反應(yīng)Buffer是怎樣的？ [ Last edited by 498243829 on 2012-1-2 at 19:36 ] |
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木(金幣+2): 鼓勵(lì)應(yīng)助，還很專業(yè)，贊一個(gè)! 2012-01-03 11:10:26
498243829(金幣+5): ★有幫助 謝謝！ 2012-01-04 15:35:46
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| 加熱到一定溫度肯定能失活，這個(gè)酶不像限制性內(nèi)切酶，還標(biāo)明了失活條件。凝血酶與適配體結(jié)合，需要適配體形成一定的構(gòu)象，也就是G四聚體結(jié)構(gòu)，K離子能穩(wěn)定這種G四聚體結(jié)構(gòu)，所以一般緩沖液中都含有幾十mM的K離子。 |
2樓2012-01-03 10:47:48
498243829
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我用過(guò)95度10min、20min、30min對(duì)實(shí)驗(yàn)還是有干擾，這樣的條件還不足以讓它完全失活嗎？還是它失活之后也干擾，假若失活后它聚沉，對(duì)DNA鏈有吸附之類的？ 我用的緩沖是20 mmol L T ris HCl,PH7.4 140 mmol /L 的 NaCl, 5 mmol /L KCl, 1 mmol/ L CaCl2 , 1 mmol/ L MgCl2 , 妥當(dāng)否？實(shí)驗(yàn)不順利，我也不清楚是否緩沖不合適 仁兄想必是這方面的高手，多給點(diǎn)指點(diǎn)吧，在下感激涕淋呀！ |
3樓2012-01-03 22:58:31
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