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qiaolinkun銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
微生物考研真題求助
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化學(xué)物質(zhì)A對(duì)細(xì)菌具有毒性，在含50mg/L物質(zhì)A的固體培養(yǎng)基上，絕大部分細(xì)菌均不能生長(zhǎng)。現(xiàn)從土樣中分離到一株可以在含物質(zhì)A的固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的假單胞菌，并已初步證實(shí)該假單胞菌能產(chǎn)生一種水解酶，將物質(zhì)A見降解為L(zhǎng)-絲氨酸和其他無害成分，但該酶的表達(dá)量極低，不利于進(jìn)一步研究和應(yīng)用。請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)大量制備該酶樣品的實(shí)驗(yàn)方案。 跪求各位大牛講解思路  |
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3樓2012-01-05 13:08:57
【答案】應(yīng)助回帖
★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
rainwander(金幣+1): 鼓勵(lì)交流 2012-01-04 12:11:41
qiaolinkun(金幣+10): ★★★★★最佳答案 謝謝 很有幫助 2012-01-04 13:35:32
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qiaolinkun(金幣+10): ★★★★★最佳答案 謝謝 很有幫助 2012-01-04 13:35:32
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1、若該水解酶基因是已知的，那么就可以提取基因組，設(shè)計(jì)引物，將該水解酶基因克隆出來，連接到表達(dá)載體上，然后進(jìn)行異源表達(dá)。 2、若該水解酶基因是未知的，那么先從假單胞菌中分離純化出該水解酶，通過SDS-PAGE確定酶的大小，并進(jìn)行N端測(cè)序。知道N端部分序列后，設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物，克隆該酶基因，之后再進(jìn)行異源表達(dá)。 |
2樓2012-01-04 11:55:42
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