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duanbinxian

新蟲 (初入文壇)

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[求助] 組織切片如何能夠牢固地固定在載玻片上？已有2人參與

我最近在做大鼠的器官組織切片染色。以前一直是將放置于防脫載玻片上的切片放入烘箱里面烘的方式來固定，但是后來要對(duì)切片做HE染色和普魯士藍(lán)染色，發(fā)現(xiàn)切片經(jīng)常會(huì)被沖掉，很是苦惱。想請(qǐng)問一下有什么方法使切片固定地更牢固？明天打算將載玻片放在酒精燈火焰上炙烤，大家看是否可行？

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1樓 2012-01-04 19:03:27

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yourwish

木蟲 (小有名氣)

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★
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看天(金幣+2): 鼓勵(lì)交流 2012-01-07 16:51:14

被沖掉的原因是：沒有包埋好。估計(jì)原因之一是脫水不夠。

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2樓2012-01-05 09:42:02

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神經(jīng)再生

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看天(金幣+3): 鼓勵(lì)回答 2012-01-07 16:51:30

首先感覺你是做的石蠟切片吧，用于石蠟切片的載玻片一般不需使用多聚賴氨酸包被，冰凍切片貼片后需要烤片機(jī)（55-60度）30Min+37度烘箱過夜或者烤片機(jī)烤片4-6小時(shí)，即可。染色的時(shí)候也要盡量避免直接沖刷樣本部位

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也許似乎大概是，然而未必不見得。

3樓2012-01-05 10:48:42

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gorrylee

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看天(金幣+2): 鼓勵(lì)回答 2012-01-07 16:51:43

實(shí)際操作中，石蠟切片的載玻片我們也使用多聚賴氨酸包被。掉片很平常，染色的時(shí)候也要盡量避免直接沖刷樣本部位。

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4樓2012-01-07 08:11:40

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5樓2013-06-23 21:37:40

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木木清月月鳥

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6樓2013-07-11 22:24:24

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willychen34

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【答案】應(yīng)助回帖

我也是這個(gè)問題，之前試過真空粘片法，效果一般，后來用這個(gè)文獻(xiàn)上的方法：應(yīng)用Steedman's wax切片法觀察植物細(xì)胞微管骨架；你可以照著試試。一直感覺烘片會(huì)影響試驗(yàn)。。。

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所謂兵來將擋，水來土掩，總有一天，會(huì)實(shí)現(xiàn)的。

7樓2015-11-17 17:33:07

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mutant

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【答案】應(yīng)助回帖

假如你包埋的組織，能夠不破裂，完整的切片，說明你前期的制作過程是沒有問題的，切片的厚度不要超過10微米，切片厚了，后面操作容易掉片。
接下來個(gè)人覺的使用脫載玻片，然后60度烘箱烤片2h，這樣可以使得組織很牢固的粘在切片上，還有在之后的操作過程一定要?jiǎng)幼骱軠睾汀?br /> 這是我曾經(jīng)做免疫組化時(shí)的經(jīng)驗(yàn)，當(dāng)時(shí)做組化還需要微波加熱煮片，來修復(fù)抗原，這個(gè)過程其實(shí)是一個(gè)很劇烈的過程，我都按上面的步驟進(jìn)行，沒有問題的

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8樓2015-11-17 22:13:41

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