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[交流]
磁珠和抗體怎樣連接？怎樣證明連接成功？
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最近在做磁珠連抗體的實(shí)驗(yàn)，遇到好多問(wèn)題。我們買來(lái)的是鏈霉親和素修飾的磁珠，把抗體和生物素反應(yīng)后，超濾離心，然后和磁珠反應(yīng)。接下來(lái)的實(shí)驗(yàn)中磁珠貼壁現(xiàn)象非常嚴(yán)重，不知道是為什么呢？各位都用什么方法進(jìn)行連接呢，我們也買了氨基和羧基修飾的磁珠。最好能說(shuō)具體些，比如濃度啊比例啊。 還有非常想知道的一點(diǎn)，怎樣證明磁珠和抗體連接成功呢？ |
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 量子點(diǎn) | 金、磁珠與抗體的結(jié)合 |
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喵汪(金幣+1):謝謝參與
lixiangde(金幣+1): 感謝回帖交流 2012-01-08 10:17:36
喵汪(金幣+1):謝謝參與
lixiangde(金幣+1): 感謝回帖交流 2012-01-08 10:17:36
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我沒(méi)做過(guò)這個(gè)，只是有點(diǎn)了解。 你磁珠沒(méi)和生物素標(biāo)記的抗體連接的時(shí)候，會(huì)不會(huì)也會(huì)發(fā)生貼壁的現(xiàn)象了。如果發(fā)生了，那就和生物素標(biāo)記的抗體沒(méi)關(guān)系。磁珠的問(wèn)題，或者反應(yīng)容器表面有什么東西的問(wèn)題 如果是和生物素標(biāo)記的抗體反應(yīng)后才出現(xiàn)你說(shuō)的現(xiàn)象，你考慮下生物素是不是標(biāo)記多了，一般一個(gè)抗體上需要連接的生物素在3到4個(gè)左右，具體的你可以找網(wǎng)上找到一些資料，不易過(guò)多，也不宜過(guò)少。 要證明抗體和磁珠連接成功，你需要先熒光標(biāo)記抗體，結(jié)合上抗體的磁珠會(huì)有熒光，不然就沒(méi)有。 |
2樓2012-01-08 08:41:33
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謝謝樓上這么耐心的回復(fù)。磁珠沒(méi)和抗體連接的時(shí)候是否發(fā)生貼壁現(xiàn)象，這個(gè)我還沒(méi)做。我們的磁珠是從天津大學(xué)的一家公司買的，不知道是不是磁珠本身的問(wèn)題。 抗體和生物素的比例約為1：30，這個(gè)是按說(shuō)明書做的。 磁珠上標(biāo)記的是生物素化一抗，反應(yīng)完后我加入了染料標(biāo)記的二抗，是能檢測(cè)到熒光的，但是對(duì)照實(shí)驗(yàn)的熒光更強(qiáng)（就是直接讓染料標(biāo)記的二抗和磁珠孵育），所以有可能二抗是吸附到磁珠上去的，而不是基于和一抗的免疫反應(yīng)。所以不足以證明生物素化一抗和磁珠連接成功，我這樣推測(cè)沒(méi)錯(cuò)吧？ |
3樓2012-01-08 11:41:38
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