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A260/A280和A260/A230的含義 已有19人參與
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1. A260nm 是核酸最高吸收峰的吸收波長(zhǎng)，最佳測(cè)量值的范圍為0.1至1.0。如果不在此范圍，稀釋或濃縮樣品，使之在此范圍內(nèi)；如果吸光度小于0.05，檢查是否存在操作因素（如移液不準(zhǔn)確，樣品內(nèi)有懸浮物等）影響。DNA樣品的A260 吸光度值是否>0.1。（請(qǐng)注意，這個(gè)值跟儀器無(wú)關(guān)，核酸的吸光度必需大于0.1，其值才有效和可靠，因?yàn)闃悠分械碾s質(zhì)和顆粒這些不純物的干擾通常會(huì)對(duì)光有一定吸收，其值<0.1）； 朗伯－比爾定律： A 吸光值 I0 入射光強(qiáng)度 I 投射光強(qiáng)度 c 吸光物質(zhì)的摩爾濃度（mol/L） d 光通過(guò)的液層厚度（cm） ε 摩爾吸光系數(shù)（Lmol-1cm-1） 2. A280nm 是蛋白和酚類物質(zhì)最高吸收峰的吸收波長(zhǎng)，比值可進(jìn)行核酸樣品純度評(píng)估：純DNA的A260/A280比值為1.8，純RNA為2.0。如果比值低，表示受到蛋白（芳香族）或酚類物質(zhì)的污染，需要純化樣品。比值=1.5相當(dāng)于50％蛋白質(zhì)/DNA溶液 3. A230nm 是碳水化合物最高吸收峰的吸收波長(zhǎng)，比值可進(jìn)行核酸樣品純度評(píng)估：純DNA和 RNA的A260/A230比值為2.5。若比值小于2.0標(biāo)明樣品被碳水化合物（糖類）、鹽類或有機(jī)溶劑污染，需要純化樣品。A230產(chǎn)生負(fù)值主要是由于在很低DNA 濃度的溶液中的一些其他成分的干擾所導(dǎo)致的。在下一個(gè)測(cè)定中，需要降低樣品的稀釋度，A230的負(fù)值會(huì)被校正。 4. A320nm或A340nm 為檢測(cè)溶液樣品的濁度和其他干擾因子。該值應(yīng)該接近0.0。如果不是，標(biāo)明溶液中有懸浮物，需要純化樣品。純樣品的A320一般是 0。 5. A260/A280和A260/A230 是核酸純度的指示值，純度好的DNA，在pH7-8.5 下其比值應(yīng)該在2.0 或2.5，A260 / A280的比值， 用于評(píng)估樣品的純度， 因?yàn)榈鞍椎奈辗迨?80 nm。 純凈的樣品比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響。 A230是多肽、芳香基團(tuán)、苯酚和一些碳?xì)浠衔锏奈舛�，A230表示樣品中存在一些污染物，如碳水化合物、多肽、苯酚等，較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0 。A280是蛋白質(zhì)的吸光度。 |
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lubuddy
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5樓2012-02-12 20:25:10
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