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byg8620新蟲 (初入文壇)
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求PCR實(shí)驗(yàn)流程，小弟是個(gè)新手求高手相助
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PCR 體系： 藥品 體積（μl） 水 6 Buffer 1 dNTP 0.2 Mg2+cl 0.2 引物（F） 0.5 （R） 0.5 Taq酶 0.1 DNA 1.5 順序： 水 + Buffer + dNTP + Mg+cl + 引物（F、R） + Taq酶（冰盒，液面下） + 離心混樣 + DNA + 離心混樣 + 礦物油（10μl豎直滴加）。 PCR： 綠： F1 Enter gax PCR體系(50--25) Run Begin 藍(lán)：Run A Enter 02 SSR Active-Siim Enter 管數(shù)（96-x） PCR體系(25-10) 亮 聚丙烯酰胺凝膠電泳： 封口：瓊脂糖凝膠封口，兩槽30ml 插板后，封住長(zhǎng)玻璃板底部，凝固后插進(jìn)電泳槽。 膠：（配方為50ml兩板80ml） 聚丙烯酰胺：20ml，水：25ml，10xTBE,APS(過(guò)硫酸銨)：500μl，TEMED：50μl。 順序：（劇毒）聚丙烯酰胺，10x TBE，水，APS、TEMED,后兩樣灌膠之前再加入，混勻。 過(guò)程：（貼壁）灌滿灌膠，有氣泡用針頭吹，插梳子，如果漏膠，用槍補(bǔ)膠。凝固后，倒入0.5x TBE，中間部分，沒過(guò)短玻璃，不到長(zhǎng)玻璃，兩邊沒過(guò)導(dǎo)電管，抜梳子，用針頭吹氣泡。 點(diǎn)樣：PCR后加入6x的加樣緩沖液（3.5μl溴酚藍(lán)），點(diǎn)樣。 染色所需藥品： 固定液：450ml水 + 50ml無(wú)水乙醇（95%）+ 2.5ml冰醋酸。 硝酸銀：500ml水 + 1g AgNO3(固體，可多不可少)。 硫代硫酸鈉：500ml水 + 120μl 10%Na2S2O3溶液（染色前配，易變質(zhì)）。 顯色劑： 500ml水 + 7.5g NaOH + 1.5ml甲醛。 染色順序： 1、固定（12min） 2、水洗（1次，可無(wú)） 3、銀染（12min） 4、 Na2S2O3（溶液由無(wú)色-棕黃色，不能太深） 5、顯色劑（有清晰的帶，10min左右） 6、固定液（6-12min） 7、水洗，包膜，拍照 |
9樓2012-02-22 04:42:04
10樓2012-02-22 10:36:36
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