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hshzhq

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[交流] 如何從已知細(xì)胞中P出某個(gè)基因，并加上酶切位點(diǎn)？

現(xiàn)在分子實(shí)驗(yàn)開始的基因獲取主要有兩種：1、購(gòu)買含有目的基因的載體，這個(gè)需要花錢；2、直接從已知表達(dá)細(xì)胞里面P出該基因。這次命題以第二種為目的，以human的Actin基因?yàn)槟繕?biāo)，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)P出該基因的引物，需要解釋清楚引物的位置和設(shè)計(jì)特點(diǎn)，兩端的酶切位點(diǎn)可以由各會(huì)員隨意設(shè)計(jì)兩個(gè)不同的酶切系列即可。
希望各回答會(huì)員能解釋一下設(shè)計(jì)的特點(diǎn)和原理。
提示：需要將大部分序列給出。
序列信息參見：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NM_001100.3

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1樓 2012-02-13 19:05:51

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exon2002

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小丹木木(金幣+2): 鼓勵(lì)回帖，情人節(jié)快樂！ 2012-02-14 10:41:52

Actin是砍價(jià)基因，在兩端設(shè)計(jì)好引物后，從絕大多數(shù)細(xì)胞（組織中都可以擴(kuò)增出來的。引物的設(shè)計(jì)根據(jù)所需片段的大小和所需的片段位置來定。一般做內(nèi)參并無此項(xiàng)要求，但不知你指的是什么。

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2樓2012-02-14 08:45:10

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exon2002

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糾正筆誤：砍價(jià)=看家

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3樓2012-02-14 08:45:48

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imyting

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hshzhq(金幣+1):謝謝參與

引物最好自己設(shè)計(jì)，借別人之手不是長(zhǎng)遠(yuǎn)之計(jì)，各種設(shè)計(jì)原則論壇中多得很。

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4樓2012-02-14 11:14:16

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wangleimin

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hshzhq(金幣+1):謝謝參與

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5樓2012-02-14 12:05:22

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都是群自己都不會(huì)的人在回復(fù)，浪費(fèi)金幣

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6樓2012-02-14 13:34:45

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引用回帖:

樓: Originally posted by exon2002 at 2012-02-14 08:45:10:
Actin是砍價(jià)基因，在兩端設(shè)計(jì)好引物后，從絕大多數(shù)細(xì)胞（組織中都可以擴(kuò)增出來的。引物的設(shè)計(jì)根據(jù)所需片段的大小和所需的片段位置來定。一般做內(nèi)參并無此項(xiàng)要求，但不知你指的是什么。

你只需要設(shè)計(jì)出引物，需要在引物中添加酶切位點(diǎn)序列。只需要能將該基因在DNA基因組中提取出來就是了。

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7樓2012-02-14 13:36:18

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8樓2012-02-15 07:05:15

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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖

LZ是要考考大家？

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9樓2012-02-15 18:39:21

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