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6105銀蟲 (小有名氣)
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關(guān)于原生質(zhì)體單核化
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| 如果菌絲沒有鎖狀聯(lián)合，且菌絲是多核的，經(jīng)過原生質(zhì)體再生，怎樣確定其菌絲是不是單核化的的？ |
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amisking(金幣+6, MicEPI+1): 鼓勵積極應(yīng)助！ 回答每次都很經(jīng)典啊！ 2012-02-17 18:30:15
6105: 金幣+1 2012-04-26 16:46:27
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呵呵。。。這正是我?guī)讉�月前考慮的問題啊。 1. 單核化檢驗：就是細(xì)胞核染色啊。 主要是DAPI和Hoechst 33258，這個有試劑賣的。另外也有用蘇木精染色的。 前兩種試劑鏈接：http://www.beyotime.com/c1002.htm http://www.beyotime.com/c1018.htm DAPI是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料。和雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生比DAPI自身強20多倍的熒光。和EB(ethidium bromide)相比，對雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。 DAPI染色常用于細(xì)胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測。DAPI也常用于普通的細(xì)胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。 DAPI的最大激發(fā)波長為340nm，最大發(fā)射波長為488nm；DAPI和雙鏈DNA結(jié)合后，最大激發(fā)波長為364nm，最大發(fā)射波長為454nm。 Hoechst 33258，也稱bisBenzimide H 33258或HOE 33258。分子式為C25H24N6O·3HCl，分子量為533.88，CAS Number 23491-45-4。 Hoechst 33258是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料，對細(xì)胞的毒性較低。 Hoechst 33258染色常用于細(xì)胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測。Hoechst 33258也常用于普通的細(xì)胞核染色，或常規(guī)的DNA染色。 Hoechst 33258的最大激發(fā)波長為346nm，最大發(fā)射波長為460nm；Hoechst 33258和雙鏈DNA結(jié)合后，最大激發(fā)波長為352nm，最大發(fā)射波長為461nm。 本Hoechst 33258染色液可直接用于固定細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色，也可直接用于活細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色。 2.如何獲得單核原生質(zhì)：一般是用孢子消化產(chǎn)生原生質(zhì)體。 孢子在培養(yǎng)5-8小時后，就開始多核化了。所以，要注意孢子的懸浮時間不能過長。這個有相關(guān)的論文發(fā)表的。 |
2樓2012-02-17 11:16:41
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3樓2012-02-17 18:29:34
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zhang8826857(金幣+1): 鼓勵交流 2012-02-18 10:12:41
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是的。 單核的原生質(zhì)體，那再生萌發(fā)以后，很快變成多核。 但是，我們的遺傳操作是針對的單核（設(shè)為核遺傳標(biāo)記A）原生質(zhì)體。 在進(jìn)行遺傳操作后，發(fā)生了改變，記為A--》B。 生長過程中，就是多核的（BB）、（BBB）等。 遺傳標(biāo)記B 容易在后代傳遞下去。 如果我們針對的是多核的原生質(zhì)體，例如（AAA）。 在進(jìn)行基因插入時，只能使其中一個核發(fā)生相同的變化，例如A--》B。 這時原生質(zhì)體就成了（AAB）。而這個AAB的原生質(zhì)體，會產(chǎn)生A B兩類遺傳標(biāo)記的菌絲體。 如下圖示： A A B （AA）（AAA） （AA）（AAA（AAAA） （AB）（BB）（AAB） 相當(dāng)于我們需要的遺傳特征B被稀釋了。相當(dāng)于出現(xiàn)了【雜核】類型。這就是用多核的原生質(zhì)體進(jìn)行基因操作，即使第一代成功了，遺傳特征也難以傳遞下去的原因之一。 |
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61054樓2012-02-18 07:10:49
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