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skywalkerelf銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
慢病毒怎么純化和濃縮呀？
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| 最近在做慢病毒的純化和濃縮，看了一些方法，離心、過柱子、過柱子+透析，不知道那種方法最有效率？有沒有好用的相關(guān)試劑盒？ |
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現(xiàn)在alstembio公司出了一個慢病毒沉淀液很好用，不要超速離心，慢病毒滴度還能提高4倍 我們實(shí)驗(yàn)室一直在用，價格還便宜，國內(nèi)好像上海起發(fā)還有現(xiàn)貨 產(chǎn)品鏈接：http://www.alstembio.com/virus-production/Lentivirus-Precipitation-Solution 慢病毒的濃縮與純化方法 1.將含有慢病毒顆粒的培養(yǎng)基從平板轉(zhuǎn)移到無菌容器中，并以300×g離心培養(yǎng)基10分鐘以除去細(xì)胞碎片。 2.通過0.45μm過濾器過濾上清液。 3.將過濾的上清液轉(zhuǎn)移到無菌容器中，并向每4體積的含有慢病毒的上清液中加入1體積的冷的慢病毒沉淀液（4℃）。（實(shí)施例：5ml慢病毒沉淀溶液，含20ml病毒上清液）。 4.充分混合并冷藏3小時至過夜。與慢病毒沉淀液混合的含有慢病毒的上清液在4°C下可穩(wěn)定長達(dá)4天。 5.在4℃下以1500×g離心混合物30分鐘。離心后，慢病毒顆�？稍谌萜鞯撞匡@示為米色或白色顆粒。 6.丟棄上清液。通過以1500×g離心5分鐘來旋轉(zhuǎn)殘留溶液。通過抽吸去除所有的液體痕跡，小心不要打擾顆粒中沉淀的慢病毒顆粒。 7.使用冷的無菌PBS或DMEM在4℃下以1/10至1/100的原始體積重懸慢病毒顆粒。 8.在低溫小瓶中分裝并儲存在-80°C直至準(zhǔn)備使用。 |
13樓2018-10-23 10:47:48
lihuan0525
金蟲 (職業(yè)作家)
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2樓2012-02-20 10:27:51
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4樓2012-02-20 16:44:05
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