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xiaoping1986銀蟲 (著名寫手)
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[求助]
發(fā)色底物法檢測方法
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| 我在網(wǎng)上查了一下發(fā)色底物發(fā)檢測的原理是，首先人工合成可以被待測凝血活酶催化裂解的化合物，且化合物連接上產(chǎn)色物質(zhì)，在檢測過程中產(chǎn)色物質(zhì)可被解離下來，使被檢樣品中出現(xiàn)顏色變化，根據(jù)顏色變化可推算出被檢凝血活酶的活性。產(chǎn)色物質(zhì)一般選用連接對硝基苯胺（PNA）。游離的PNA呈黃色，其測定波長選用405nm。具體檢測方法即可采用動態(tài)法、也可采用終點法。動態(tài)法即是連續(xù)記錄樣品的吸光度變化，算出單位時間吸光度的變化量，并以每分鐘吸光度的變化來報告結(jié)果。終點法即是指在活性酶同產(chǎn)色物質(zhì)作用一段時間后，加入乙酸終止反應(yīng)，檢測此段時間內(nèi)吸光度的變化，進而推算出待檢酶的活性。但是還是不太清楚操作的具體步驟是什么，比如怎樣動態(tài)法中記錄連續(xù)變化吸光度的變化時怎樣記錄數(shù)據(jù)，怎樣計算結(jié)果的，有沒有公式什么的？再有這種方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線是怎樣測定？比如文獻中說加入0.1mL底物和酶37度下保溫5min,在405nm下測定，底物有S-2288，S222等，請高手告知一下這個是怎樣操作的，具體操作步驟是什么，非常感謝！ |
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