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lslsdjn金蟲 (正式寫手)
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[求助]
一段關(guān)于蛋白質(zhì)分子量測定的翻譯。。。。。。。多謝多謝
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For Mr determinations, the protein samples were mixed 1:1 with 2× SDS sample buffer containing β-mercaptoethanol and boiled for 5 min before being separated by SDS-PAGE. Prestained Mr（分子量） standards (BioRad) were run on each gel as a standard. Following electrophoresis, proteins were either visualized with Commassie Blue dye (BioRad) or transblotted to PVDF membrane (BioRad) using a transblot semidry electrophoretic transfer cell at 20V for 25–30 min. Transfers were done using 48 mM Tris, 39 mM Gly, 0.0375% (w/v) SDS, and 12% (v/v) methanol (pH 9.2) as a transfer buffer. Immunoblots were incubated with a 1:100 dilution (diluted in 1% BSA/TBST) of PPO antiserum developed from our purified wheat bran protein.Antigens were visualized by alkaline phosphatase-conjugated goat and antimouse (Sigma) and 5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate and nitro blue tetrazolium (Sigma). |
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【答案】應(yīng)助回帖
lslsdjn(金幣+10): ★★★★★最佳答案 真強！多謝！ 2012-02-25 17:11:09
| 為了確定蛋白的分子量大小，將蛋白樣品與含β-巰基乙醇的2乘（也就是2倍）SDS緩沖液按1：1混合，煮沸5分鐘，然后用SDS凝膠電泳來進行分離。預(yù)染好的分子量標準品（BioRad公司，即蛋白Marker）點在膠上作為對照。電泳后，可以用考馬斯亮藍（BioRad公司）來染蛋白進行檢測或是用轉(zhuǎn)膜儀在20伏電壓下25-30分鐘，將蛋白轉(zhuǎn)印至PVDF（硝酸纖維素膜）上。轉(zhuǎn)印時時所用緩沖液包含有48 mM Tris, 39 mM甘氨酸, 0.0375% (w/v) SDS, 以及 12% (v/v) 甲醇 (pH 9.2)。自我們提取的小麥糠蛋白純化而得的PPO抗血清用1% BSA/TBST按照1：100進行稀釋，進行免疫印跡孵育�？乖瓕�(yīng)的抗體為堿性磷酸酶標記的羊抗鼠（Sigma公司）并用BCIP/NBT（Sigma公司）顯色。 |
4樓2012-02-25 16:44:08
moqing1991
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2樓2012-02-25 10:48:28
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3樓2012-02-25 11:14:49
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5樓2012-02-25 16:46:02
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