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嘟嚕金蟲 (小有名氣)
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[求助]
絲狀真菌菌絲體破碎細(xì)胞壁，不要胞內(nèi)酶，求助最簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)方法。。。
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| 如題，想用有機(jī)溶劑乙酸乙酯萃取絲狀真菌菌絲體內(nèi)的小分子化合物分子量低于500，不要胞內(nèi)酶，想求助最簡(jiǎn)單實(shí)用的具體實(shí)驗(yàn)方法，超聲波破碎法就不要說(shuō)了，實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有超聲波破碎儀，高壓勻漿法也繞行吧，也沒(méi)有儀器。其實(shí)我就是想知道用什么有機(jī)溶劑浸泡可以裂解真菌細(xì)胞壁，具體比例，浸泡時(shí)間等，如果是反復(fù)凍融法，想問(wèn)問(wèn)反復(fù)凍融具體幾次啊，想找個(gè)最簡(jiǎn)單而且實(shí)用的。。。。。。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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1、高速組織搗碎：將材料配成稀糊狀液，放置于筒內(nèi)約1/3體積，蓋緊筒蓋，將調(diào)速器先撥至最慢處，開動(dòng)開關(guān)后，逐步加速至所需速度。此法適用于動(dòng)物內(nèi)臟組織、植物肉質(zhì)種子等。 2、玻璃勻漿器勻漿：先將剪碎的組織置于管中，再套入研桿來(lái)回研磨，上下移動(dòng)，即可將細(xì)胞研碎，此法細(xì)胞破碎程度比高速組織搗碎機(jī)為高，適用于量少和動(dòng)物臟器組織。 3、超聲波處理法：用一定功率的超聲波處理細(xì)胞懸液，使細(xì)胞急劇震蕩破裂，此法多適用于微生物材料，用大腸桿菌制備各種酶，常選用50-100毫克菌體/毫升濃度，在1KG至10KG頻率下處理10-15分鐘，此法的缺點(diǎn)是在處理過(guò)程會(huì)產(chǎn)生大量的熱，應(yīng)采取相應(yīng)降溫措施。對(duì)超聲波敏感和核酸應(yīng)慎用。 4、反復(fù)凍融法：將細(xì)胞在-20度以下冰凍，室溫融解，反復(fù)幾次，由于細(xì)胞內(nèi)冰粒形成和剩余細(xì)胞液的鹽濃度增高引起溶脹，使細(xì)胞結(jié)構(gòu)破碎。 5、化學(xué)處理法：有些動(dòng)物細(xì)胞，例如腫瘤細(xì)胞可采用十二烷基磺酸鈉（SDS）、去氧膽酸鈉等細(xì)胞膜破壞，細(xì)菌細(xì)胞壁較厚，可采用溶菌酶處理效果更好。 無(wú)論用哪一種方法破碎組織細(xì)胞，都會(huì)使細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)或核酸水解酶釋放到溶液中，使大分子生物降解，導(dǎo)致天然物質(zhì)量的減少，加入二異丙基氟磷酸（DFP）可以抑制或減慢自溶作用；加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性，加入苯甲磺酰氟化物（PMSF）也能清除蛋白水解酥活力，但不是全部，還可通過(guò)選擇pH、溫度或離子強(qiáng)度等，使這些條件都要適合于目的物質(zhì)的提取。 |
10樓2012-02-27 19:22:07
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3樓2012-02-27 00:57:54
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4樓2012-02-27 08:47:29
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5樓2012-02-27 09:39:24
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