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youngsun50木蟲 (正式寫手)
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[求助]
細(xì)菌雙向電泳樣品制備：如何提取總蛋白？
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我是新手，之前也參考了一些方法，今天試驗(yàn)出了點(diǎn)兒狀況，望高手指點(diǎn)一下。我的試驗(yàn)過程如下： 培養(yǎng)了100ml菌體（肺炎克雷伯，G-）16h,收集菌體，用20mM Tris清洗兩遍后，加入了1ml的裂解緩沖液（8M尿素，65mM DTT，10mM Tris，2mM PMSF）重懸菌體。 （因?yàn)槲业木鸀榕R床治病菌故不想在露天環(huán)境中超聲，先選擇反復(fù)凍融試試。） 反復(fù)凍融法：液氮20s后置34度水浴，反復(fù)了八九次。不見澄清，于是無奈又進(jìn)行了超聲。結(jié)果一超就出現(xiàn)大量泡沫，無法進(jìn)行。 請問各位蟲友：菌體選用什么方法破裂好呢，溶菌酶法加入的溶菌酶是否影響結(jié)果分析；還有，我的菌體量是否過多了？ 謝謝  [ Last edited by youngsun50 on 2012-3-6 at 07:47 ] |
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