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跋涉者米米新蟲 (初入文壇)
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[求助]
請教一些宏基因組的問題，牛人來解答一下啊
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最近準(zhǔn)備做宏基因組文庫，在網(wǎng)上也查看了一些資料，滿腦子充滿了疑惑，覺得一頭霧水，不知道是自己天資愚笨還是怕麻煩，無奈總結(jié)總結(jié)，有這樣幾個問題急需大家的幫忙解答： 1、做宏基因組文庫的時候，提取的DNA基因組進(jìn)行電泳檢測，用入-hind3DNAmarker 是否可以就根據(jù)平時的電泳檢測條件一樣，1%瓊脂凝膠，100v電壓跑了來檢測呢？ 2、純化后的DNA進(jìn)行酶切，我看有些資料是收集2-9KB的片段，如果我一個樣品的DNA酶切后，比對MARKER發(fā)現(xiàn)2-9kb的片段有只有三個，我就對這三個進(jìn)行回收，然后用這三個片段來作為連接的目的DNA么？ 3、2-9kb的片段選擇的載體可不可以都選擇同一種載體pbluescriptsk+呢？ 4、載體是不是要經(jīng)過酶切和去磷酸化��？載體的酶切所用的內(nèi)切酶可以和DNA酶切的酶一樣么，比如都用BamH1? 5、可不可以事先計(jì)算好需要多少個克隆子？一般一個平板上長多少個克隆子比較合適呢？ 問題大概就是這些了，因?yàn)閷?shí)在是很迷茫啊，問的問題可能有點(diǎn)低級，希望各位大俠不吝賜教，在此先謝過了。。�！� |
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