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mahoumeimei金蟲 (小有名氣)
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[求助]
RNA電泳
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各位，我的RNA電泳結(jié)果很差，是降解了嗎？（最左邊是生工的100bp DNA ladder）我是剛提完就跑的電泳，是提取過程中操作不當(dāng)嗎？ RNA電泳 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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mahoumeimei(金幣+2): 2012-03-14 17:10:19
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mahoumeimei(金幣+2): 2012-03-14 17:10:19
| 我之前大量提RNA，最重要的就是要避免RNA降解！你的條帶很不清晰而且未分條帶，可能原因：1.取的組織少或水溶解過多，導(dǎo)致RNA量太少；2.理論上可以不用跑Marker滴，但從你的Marker看也不太清晰而各條帶未分開，可能是膠問題、跑膠時(shí)間也短了些；3.從源頭上分析，可能樣品也已經(jīng)有些降解！改善實(shí)驗(yàn)條件多做幾次，熟悉過程，自然速度就快了！~~加油~ |
12樓2012-03-13 20:02:08
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小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-03-15 13:33:04
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小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-03-15 13:33:04
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1：你可以買RNase-free的槍頭，EP管，或者自己用0.1%DEPC水浸泡普通的槍頭，然后高壓處理后使用（我每次使用前高壓3次）； 2：玻璃制品要清洗干凈后，再用雙蒸水清洗2-3遍，然后在180度烘烤至少6小時(shí)，烘烤前塑料蓋子不能放進(jìn)去，所有瓶子的瓶口要用錫箔紙蓋好； 3.提取RNA時(shí)你的所有試劑，用品都要在一個(gè)干凈的環(huán)境中進(jìn)行，建議在超凈臺(tái)里操作，離心前離心機(jī)要提前打開，所有操作都要勤換手套，帶口罩； 4。電泳使用的電泳槽、梳子，制膠板等要用3%的雙氧水處理至少半小時(shí)或用0.5%的氫氧化鈉溶液浸泡過夜，然后用高壓后的0.1%DEPC水清洗干凈再用； 5.所有試液的配制要全部使用高壓后的0.1%的DEPC水溶液配制。 |
23樓2012-03-15 12:38:44
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小丹木木(金幣+5): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-03-13 10:30:55
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小丹木木(金幣+5): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-03-13 10:30:55
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轉(zhuǎn)自生物秀http://www.bbioo.com/experiment/13-1223-1.html 1、RNase 是RNA制備的殺手 RNase酶非常穩(wěn)定，是導(dǎo)致RNA降解最主要的物質(zhì)。它在一些極端的條件可以暫時(shí)失活，但限制因素去除后有迅速?gòu)?fù)性。用常規(guī)的高溫高壓蒸氣滅菌方法和蛋白抑制劑都不能是RNase完全失活。它廣泛存在于人的皮膚上，因此，在與RNA制備有關(guān)的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)時(shí)，必須戴手套。RNase的又一污染源是取液器。根據(jù)取液器制造商的要求對(duì)取液器進(jìn)行處理。一般情況下采用用DEPC配制的70%乙醇擦洗取液器的內(nèi)部和外部，基本達(dá)到要求。取RNase-free的物品時(shí)必須戴手套。 2、塑料制品、玻璃和金屬物品的處理 (a)塑料制品：盡可能使用無菌，一次性塑料制品。已標(biāo)明RNase-Free 的塑料制品，如沒有開封使用過，通常沒有必要再次處理。對(duì)于國(guó)產(chǎn)塑料制品，原則上都必須處理方可使用。處理方法如下： (1)在玻璃燒杯中注入去離子水，加入DEPC使DEPC的終濃度為0.1%。注意：DEPC為劇毒物，活性很強(qiáng)，小心在通風(fēng)柜中使用。 (2)將待處理的塑料制品放入一個(gè)可以高溫滅菌的容器中，注入DEPC水溶液，使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中。 (3)在通風(fēng)柜中室溫處理過夜。 (4)將DEPC水溶液小心倒到廢液瓶中，用鋁箔封住含已DEPC水處理過的塑料制品的燒杯，高溫高壓蒸氣滅菌至少30分鐘。 (5)烘箱用合適的溫度烘拷至干燥。置于干凈處備用。 (b)玻璃和金屬物品 250°C烘烤3小時(shí)以上。 |
6樓2012-03-12 18:55:20
mahoumeimei
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8樓2012-03-12 20:04:55
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9樓2012-03-12 23:42:14
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【答案】應(yīng)助回帖
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西瓜(金幣+1): 鼓勵(lì)交流。RNA沒提出來也是很可能的。 2012-03-14 22:29:58
mahoumeimei: 金幣+1 2012-03-27 11:28:51
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西瓜(金幣+1): 鼓勵(lì)交流。RNA沒提出來也是很可能的。 2012-03-14 22:29:58
mahoumeimei: 金幣+1 2012-03-27 11:28:51
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首先，環(huán)境樣本里面的RNA抽提對(duì)于材料的預(yù)處理很重要，要確保能夠分離完整的環(huán)境樣品RNA 其次，幾乎可以肯定，你的瓊脂糖電泳里面含有大量的RNase，而且，一般大家都用的TAE/TBE，電泳時(shí)間太長(zhǎng)了；100%降解！ 第三，更清晰的條帶需要用尿素膠或者甲醛膠。 Good luck~ |
10樓2012-03-13 08:37:09
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