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[求助] 求碧云天BCA測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線的OD值

有用碧云天BCA試劑盒做過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線的筒子嗎？
不知道是不是實(shí)驗(yàn)室的酶標(biāo)儀壞了，今年測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線，1mg/ml的BSA對(duì)應(yīng)的OD值竟然是0.709，測(cè)了好多次大概都是這個(gè)數(shù)值。而去年這個(gè)時(shí)候1mg/ml的BSA對(duì)應(yīng)的OD值是1.1左右的。是不是我們實(shí)驗(yàn)室的酶標(biāo)儀有問(wèn)題��？

下面是標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)試過(guò)程中各點(diǎn)對(duì)應(yīng)的濃度和OD值
0（0.089）0.05mg/ml（0.152） 0.1mg/ml（0.182）0.2mg/ml（0.253）0.4mg/ml（0.377）0.6mg/ml（0.484）0.8mg/ml（0.605）1.0mg/ml（0.709）

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1樓 2012-03-12 17:41:56

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chf11115808

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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

酶標(biāo)儀的型號(hào)，以及你是否使用了最適合的吸收波長(zhǎng)？

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Goodcompanyontheroadistheshortestcut

2樓2012-03-30 11:03:00

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【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

每次做的標(biāo)曲數(shù)值都會(huì)有一些偏差的，這也是正常的。這跟你加樣時(shí)操作有關(guān)，比如槍尖有時(shí)會(huì)留有少量蛋白，沒(méi)有完全加到孔中，造成人為的誤差。還有每一次測(cè)定時(shí)，孵育的時(shí)間也有關(guān)系。時(shí)間稍長(zhǎng)一些（超過(guò)30min），它的顏色就有可能變得加深了。所以不能保證實(shí)驗(yàn)的標(biāo)曲數(shù)據(jù)每次均相同。

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3樓2012-03-30 12:52:01

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judyleezy

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2樓: Originally posted by chf11115808 at 2012-03-30 11:03:00:
酶標(biāo)儀的型號(hào)，以及你是否使用了最適合的吸收波長(zhǎng)？

去年和今年用的是同一個(gè)酶標(biāo)儀波長(zhǎng)也沒(méi)錯(cuò) 562nm 可是1mg/ml的OD值就不對(duì)了我懷疑酶標(biāo)儀壞了要是酶標(biāo)儀壞了測(cè)得的濃度是不是就不對(duì)了？

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4樓2012-04-11 19:15:39

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3樓: Originally posted by 2011加油 at 2012-03-30 12:52:01:
每次做的標(biāo)曲數(shù)值都會(huì)有一些偏差的，這也是正常的。這跟你加樣時(shí)操作有關(guān)，比如槍尖有時(shí)會(huì)留有少量蛋白，沒(méi)有完全加到孔中，造成人為的誤差。還有每一次測(cè)定時(shí)，孵育的時(shí)間也有關(guān)系。時(shí)間稍長(zhǎng)一些（超過(guò)30min）， ...

我基本會(huì)保持孵育時(shí)間在30min 每次取20ul也不會(huì)錯(cuò)吧我主要是覺(jué)得1mg/ml對(duì)應(yīng)的OD值和以前差太多了

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5樓2012-04-11 19:18:18

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★
judyleezy: 金幣+1, ★★★很有幫助 2012-04-16 20:12:29

每次都會(huì)有偏差，這是正常的，如果相差太大，可以嘗試找到較近的兩臺(tái)酶標(biāo)儀去測(cè)定看看啊。比較比較結(jié)果，順便看看樣品的OD值是否也因酶標(biāo)儀的不同，OD值也會(huì)有較大變化，原因就很快找到了。

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6樓2012-04-12 19:12:20

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6樓: Originally posted by 2011加油 at 2012-04-12 19:12:20:
每次都會(huì)有偏差，這是正常的，如果相差太大，可以嘗試找到較近的兩臺(tái)酶標(biāo)儀去測(cè)定看看啊。比較比較結(jié)果，順便看看樣品的OD值是否也因酶標(biāo)儀的不同，OD值也會(huì)有較大變化，原因就很快找到了。

主要是附近沒(méi)有第二臺(tái)酶標(biāo)儀所以想來(lái)這里看看最近論壇里有人做過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線沒(méi)

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7樓2012-04-13 19:03:11

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請(qǐng)問(wèn)樓主標(biāo)曲里空白對(duì)照的吸光度變大了嗎？如果都變大并不影響結(jié)果�？赡苁悄銉纱斡玫�96孔板本身吸光度差別比較大

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8樓2013-03-05 11:37:02

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5樓: Originally posted by judyleezy at 2012-04-11 19:18:18
我基本會(huì)保持孵育時(shí)間在30min 每次取20ul也不會(huì)錯(cuò)吧我主要是覺(jué)得1mg/ml對(duì)應(yīng)的OD值和以前差太多了

...

孵育的溫度也一樣嗎，蟲子 2011加油的解釋是講得通的，OD值的差異，如果說(shuō)你儀器是沒(méi)有問(wèn)題的話，就說(shuō)明BCA和你樣品的反應(yīng)程度一樣，導(dǎo)致顏色深度的變化，BCA和你樣品的反應(yīng)程度取決于反應(yīng)時(shí)間和反應(yīng)溫度，你看看這兩次的實(shí)驗(yàn)室條件是不是完全一致

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9樓2013-03-05 18:22:23

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也可能溫度，這個(gè)od值變化的確有的，不過(guò)線性好不好，如果好的話，可以看看線性的斜率和以前一樣嗎，如果差距不大的話，可以繼續(xù)使用，酶標(biāo)儀壞的可能性不大

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10樓2015-01-21 15:06:04

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