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lihuan0525

金蟲(chóng) (職業(yè)作家)

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telomerase: 金幣+2, 謝謝你的熱心應(yīng)助 2012-03-17 15:41:04

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15樓: Originally posted by amq7392 at 2012-03-15 14:23:08:
請(qǐng)問(wèn)在酶尚未純化出來(lái)之前，有啥辦法能弄清它的等電點(diǎn)呢？

這個(gè)我也沒(méi)有做過(guò)，你從網(wǎng)上查查資料吧

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21樓2012-03-15 18:41:05

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lzgxgz

至尊木蟲(chóng) (正式寫手)

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telomerase: 金幣+2, 謝謝你的熱心應(yīng)助 2012-03-17 15:40:19

引用回帖:

20樓: Originally posted by amq7392 at 2012-03-15 15:15:45:
嗯，我每次過(guò)完柱子都用氫氧化鈉處理的。如果真是填料壞了，那就必須換了。

要是這樣，還真不好說(shuō)因?yàn)槭裁矗?br /> 也許是有蛋白在等電點(diǎn)，濃度高時(shí)有析出，在洗脫時(shí)析出導(dǎo)致堵塞
1m鹽再生時(shí)要不就換個(gè)ph

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22樓2012-03-15 19:14:52

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amq7392

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引用回帖:

22樓: Originally posted by lzgxgz at 2012-03-15 19:14:52:
要是這樣，還真不好說(shuō)因?yàn)槭裁矗?br /> 也許是有蛋白在等電點(diǎn)，濃度高時(shí)有析出，在洗脫時(shí)析出導(dǎo)致堵塞
1m鹽再生時(shí)要不就換個(gè)ph

嗯，謝謝你的建議，我試一下吧。

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23樓2012-03-16 09:12:38

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yuanbo934

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9樓: Originally posted by amq7392 at 2012-03-15 09:40:14:
過(guò)一夜會(huì)消耗N升緩沖液啊，呵呵�！�5%梯度洗脫”啥意思？

上樣時(shí)應(yīng)該注意電導(dǎo)變化，如果電導(dǎo)發(fā)生明顯變化，說(shuō)明你上的樣品與緩沖液離子強(qiáng)度不同，最終導(dǎo)致蛋白掛不上住�！�5%梯度洗脫“AKT”一共有三個(gè)泵，其中兩個(gè)與洗脫有關(guān)的泵A,B.一般用A1上緩沖液，B1上洗脫液一般用（緩沖液+1M Nacl)，5%梯度洗脫就是緩沖液加上5%B1的緩沖液洗脫,然后用10%洗脫，15%洗脫，以此類推。這樣沒(méi)洗脫一次就應(yīng)該有個(gè)峰值。

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24樓2012-03-16 10:12:31

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jylingg

木蟲(chóng) (正式寫手)

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【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

柱床的體積與上樣量是一定有聯(lián)系的，要充分平衡柱床，不能有氣泡，收集時(shí)的滴速不能過(guò)快，還要進(jìn)行酸堿平衡，蛋白才不會(huì)變性

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25樓2012-03-16 10:14:05

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sspxiaoji

銀蟲(chóng) (正式寫手)

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【答案】應(yīng)助回帖

★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
amq7392: 金幣+1, ★有幫助 2012-03-20 11:13:57

1、很明顯，你的柱子沒(méi)有裝好，但即使這樣也不至于出現(xiàn)你描述的問(wèn)題；
2、你的梯度洗脫液描述的很模糊，但也不會(huì)出現(xiàn)你說(shuō)的問(wèn)題；
我覺(jué)得最有可能的是你的樣品量太小，柱子太大了。最好檢查下檢測(cè)器有沒(méi)有問(wèn)題。

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26樓2012-03-16 10:48:55

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zx6291

銅蟲(chóng) (小有名氣)

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【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

蛋白上樣量過(guò)濃了，超過(guò)樹(shù)脂的上載量了

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27樓2012-03-16 13:32:07

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baodongq

禁蟲(chóng) (正式寫手)

★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
amq7392: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2012-03-20 11:14:25

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28樓2012-03-16 17:00:15

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chen_xiao_xu

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★ ★
amq7392: 金幣+3, ★★★很有幫助 2013-08-19 15:23:12

你的柱子壓的不實(shí)把，再一個(gè)就是你用1M Nacl洗脫時(shí)的流速多大？是不是流速大把柱料壓塌了。你的樣品是不是很臟��；洗脫峰很寬，你可以用分步梯度洗脫：如50mM nacl、100mM nacl、分布洗脫，用線性梯度洗脫容易把峰托寬，在一個(gè)就是你測(cè)測(cè)你裝的柱子的柱效是不是很好。

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29樓2013-08-19 10:49:52

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