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云琪新蟲 (小有名氣)
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[求助]
光吸收值是產(chǎn)物的還是底物的
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漆酶:5 mL 反應(yīng)體系中，加入 3.6 mL（0.219mol/L） pH4.5 醋酸緩沖液，400 μL 0.01 mmol/L 愈創(chuàng)木酚，1 mL 粗酶液，充分混勻后，30℃準(zhǔn)確反應(yīng) 30 min，冰浴終止反應(yīng)，立即在 465 nm 處比色，測(cè)定反應(yīng)30 min 內(nèi)酶活的變化，以熱滅活酶液做對(duì)照。每分鐘每 μmol 愈創(chuàng)木酚被氧化所需的酶量為一個(gè)活力單位（U）。酶活的計(jì)算公式：酶活力=（稀釋倍數(shù)×OD 值）/（12100×30×V/10^ 6）(木酶ZF-2) 錳過氧化物酶錳依賴過氧化物酶(Manganese-dependent per-oxidases, MnPs):反應(yīng)體系中含50 mmol/L （0.219mol/L）pH4.5的乳酸鈉緩沖液3.4 mL,1.6 mmol/L的硫酸錳溶液0.1 mL,粗酶液0.4mL。37℃水浴兩分鐘后加入1.6 mmol/L的H2O20.1 mL,啟動(dòng)反應(yīng).室溫下240 nm處測(cè)反應(yīng)4 min時(shí)OD改變值.酶活定義為: 1個(gè)酶活力單位用每分鐘吸光值增加0.1的酶量來表示。。（梁振普加邱愛連） 木素過氧化物酶：以LiP在H2O2存在下氧化Azure B染料來表示LiP活力的方法125 mmol/L（100mol/L檸檬酸緩沖液）的酒石酸鈉緩沖液（pH 3.0）1 mL，0.160 mmol/L的Azure B溶液500μL，培養(yǎng)基濾出液500μL，30℃下加入2 mmol/L的H2O2溶液500μL啟動(dòng)反應(yīng)，測(cè)反應(yīng)最初3 min內(nèi)651 nm處OD值減小速率，1個(gè)酶活力單位以每分鐘每毫升的培養(yǎng)基濾出液降低0.1個(gè)OD值來表示。 各位蟲友，最近在做木質(zhì)素酶的酶活測(cè)定，遇到一些麻煩呀。以以上的方法。在漆酶測(cè)定中的465nm的測(cè)定是愈創(chuàng)木酚的吸收波長還是一它為底物產(chǎn)物的吸收波長 錳過氧化物酶：240nm二價(jià)錳離子的吸收波長還是其產(chǎn)物的吸收波長 木素過氧化物酶：651nm甲苯胺藍(lán)的的吸收波長還是其產(chǎn)物的吸收波長 感謝你的賜教 |
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云琪
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| 感謝你們的好心好新回復(fù)！請(qǐng)問你們做的 Lac 的OD值增加是不是很少呀！愈創(chuàng)木酚需要現(xiàn)配嘛？你們對(duì)于以上的方法是否都有嘗試，有更好的建議請(qǐng)轉(zhuǎn)告我！感謝你的恩澤，郵箱：ambitiousmaster@126.com |
7樓2012-03-24 16:10:50
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