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重組的載體轉(zhuǎn)到菌里再提質(zhì)粒就變成這樣了，也不知道能用不
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載體是pCDNA3（5400bp)，插入了一個(gè)830多的基因，加起來應(yīng)該6200bp左右，轉(zhuǎn)到JM109里，再提質(zhì)粒，上方有很亮很粗一條帶，不知道是什么。 一共三組，第一組（從左向右）是用的pET21b(5443bp)做的載體，同樣的插入基因。后兩組都是pCDNA3。Maker用的是lamda HindIII,第一至三條帶分別為23130bp,9416bp,4361bp。所以我覺得我的重組質(zhì)粒大小也不太對，跑的稍微往上了點(diǎn)。但是測序結(jié)果是對的。當(dāng)時(shí)挑的單克隆也PCR鑒定過，也是有插入基因條帶的。不知道這亮帶到底是什么，為什么用pET載體就沒有。很擔(dān)心會(huì)影響后續(xù)試驗(yàn)，哪位大俠幫我分析分析。 |
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zhaohq1209
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提取質(zhì)粒后直接跑電泳并不能根據(jù)在瓊脂糖凝膠上的位置判斷質(zhì)粒的大小，這是因?yàn)橘|(zhì)粒有多重構(gòu)型，而且又是環(huán)狀，你的marker是線性marker。所以，最好的方法是提取的質(zhì)量進(jìn)行單酶切或雙酶切，然后再跑電泳。 以圖上來看，你的JM109是有質(zhì)粒的，一般就不會(huì)錯(cuò)。 |
2樓2012-03-23 07:00:53
yanhua_2006
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小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)應(yīng)助，很熱心哦 2012-03-23 14:35:04
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| 質(zhì)粒直接電泳跑出來的條帶大小無法準(zhǔn)確判斷，如樓上所說，最好進(jìn)行一下酶切然后再電泳。不過還有一點(diǎn)，即使是那樣，可能電泳液不一定能準(zhǔn)確表明條帶的大小。一般EB染色誤差會(huì)小很多，如果你采用Sybr Green之類的染色劑染色，可能誤差會(huì)更大一些。至于你這次的電泳圖，我覺得可能跟你提取過程中的操作有關(guān)，或者跟你所用的宿主菌有關(guān)，有可能有雜志的影響。個(gè)人意見，僅供參考。 |
3樓2012-03-23 08:30:40
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4樓2012-03-23 09:46:42
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