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[交流]
SDS-PAGE樣品濃縮的方法
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SDS-PAGE樣品需要濃縮大家用的是什么試劑（例如：TCA）？具體步驟？ [ Last edited by chunqizzm on 2012-3-25 at 23:36 ] |
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4樓2012-03-26 09:13:32
3樓2012-03-25 23:43:09
xingnian0925
金蟲 (小有名氣)
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5樓2012-03-26 09:16:16
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
chunqizzm: 金幣+5, 有幫助！謝謝��！不知道你有計(jì)算過這種方法的樣品回收率沒有？ 2012-03-26 21:40:40
chunqizzm: 回帖置頂 2012-03-26 21:40:44
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
chunqizzm: 金幣+5, 有幫助！謝謝��！不知道你有計(jì)算過這種方法的樣品回收率沒有？ 2012-03-26 21:40:40
chunqizzm: 回帖置頂 2012-03-26 21:40:44
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這是我一直用的TCA方法 Normal TCA To eliminate TCA soluble interferences and protein concentration 1) To a sample of protein solution add Trichloroacetic acid (TCA) 100% to get 13% final concentration. Mix and keep 5min –20C and then 15min 4C; or longer time at 4C without the –20C step for lower protein concentration. Suggestion: leave ON if the protein concentration is very low. 1) (preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottle at 4C.Be careful, use gloves!!!). 2) Spin 15min 4C in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see). 3) For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer. (The presence of some TCA can give a yellow color as a consequence of the acidification of the sample buffer ; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer color.) |
6樓2012-03-26 21:07:16
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