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dl19871205銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
殼聚糖-戊二醛吸附交聯(lián)法固定β-半乳糖苷酶
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最近做殼聚糖-戊二醛吸附交聯(lián)法固定β-半乳糖苷酶，具體方法如下： •殼聚糖微球的制備 0.3 g殼聚糖用20 mL 2%的乙酸溶液溶解，超聲至氣泡消失變成透明凝膠。用1 mL移液槍移取5 mL上述凝膠至25 mL凝結(jié)液中。凝結(jié)液組成為15%NaOH溶液/95%乙醇(v/v)=4︰1。4℃下硬化12 h后用去離子水洗微球至中性，4℃保存。 •殼聚糖微球固定化β-半乳糖苷酶(先交聯(lián)后固定) 準(zhǔn)確稱取一定質(zhì)量殼聚糖微球于5 mL 濃度1%、pH 6.5的戊二醛溶液中，30℃下振蕩(150rpm)交聯(lián)2h。洗去多余的戊二醛。向活化的殼聚糖小球中加入0.1 mLβ-半乳糖苷酶，用pH 6.5的磷酸鹽緩沖液稀釋至5 mL，30℃振蕩12h后，洗去小球表面的游離β-半乳糖苷酶即制得固定化β-半乳糖苷酶。 測(cè)定上清液剩余酶活基本沒有，用測(cè)定游離酶活的方法測(cè)定固定化β-半乳糖苷酶的酶活也很小，計(jì)算下來酶活回收率都不到1%。問題：如果上清液基本沒有酶活，理論上固定化酶酶活應(yīng)該相對(duì)較高，但是現(xiàn)在卻很低。即使戊二醛會(huì)使部分固定化酶失活也不至于這么低吧？ 請(qǐng)高手指點(diǎn)！不勝感激！ |
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4樓2014-06-23 13:01:22
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2樓2012-04-07 09:42:18
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5樓2014-08-20 10:53:22
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