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Hannet金蟲 (正式寫手)
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[交流]
凝膠層析和裝柱以及柱效問題 已有9人參與
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我在GE的sephacry s-100填料150ml，裝在華美的1.6×70dcm的柱子中，做crude extract的分離，第一次裝柱，沒有用裝柱器，用燒杯慢慢灌入，自然沉降。第一次跑得到很好地4個(gè)蛋白峰。入圖1.1 以后重新裝了好幾次柱，都跑不出這樣的效果，只有一個(gè)蛋白峰，后面的峰分不開。安裝說明書上2步裝柱法裝的柱，今天用丙酮安裝說明書上的方法測(cè)了一下柱效，跑出如下圖1.2，這樣的圖，不知道是什么原因，柱效也沒有計(jì)算，因?yàn)檎f明書上的測(cè)柱效的圖，峰是對(duì)稱的。因?yàn)闆]有裝柱器，所以都是沒有用，凝膠沒有抽氣，因?yàn)檎f明書沒有要求抽氣。凝膠是用dd H2O溶。 不知道是什么原因，我想可能是過了多次后，柱子強(qiáng)結(jié)合的蛋白把微孔堵了，我安裝說明用0.5M NaoH 和30%異丙醇洗過，在測(cè)住校的。 安裝時(shí)的流速都是安裝要求，沒有超過2ml/min。跑的流速是0.5-0.7ml/min。 請(qǐng)大家提出寶貴的意見和指點(diǎn)。謝謝大家。 圖1.1 圖1.2 |
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