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鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
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免疫原的制備 照以下步驟,通過MBS法使序列號1表示的肽抗原Cys的N末端與KLH結(jié)合形成免疫原。 【0058】 即向10mg KLH/2ml磷酸緩沖液滴加0.8mg MBS/100μl DMF(Dimethylformamide二甲基甲酰胺),室溫?cái)嚢?0分鐘,離心分離后,用磷酸緩沖液(以下用PBS 表示)通過SephadexG-25進(jìn)行組分分離。分離所得第一個(gè)峰的溶液與5mg固相法連續(xù)合成的肽(序列號1)進(jìn)行混合,4℃攪拌過夜得到免疫原。 【0059】 <肽抗體的產(chǎn)生> 上述所得免疫原與弗氏完全佐劑等量混合,得到乳濁液,用該乳濁液0.5-1ml分別對5只日本白色家兔在兩周內(nèi)進(jìn)行4次皮下注射,免疫開始后兩個(gè)月進(jìn)行采血,使用常規(guī)方法得到抗血清No.1~5(以下用肽抗體溶液No.1~5表示),用以下程序通過ELISA法對抗體滴度進(jìn)行測定。 |
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