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zoo594168874新蟲(chóng) (初入文壇)
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土壤中堿性磷酸酶的測(cè)定方法 已有1人參與
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| 有誰(shuí)知道怎么測(cè)定土壤中的堿性磷酸酶，我要詳細(xì)步驟 |
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脲酶 《土壤酶及其研究法》 P ．296． 1．試劑配制 (I)ph=6．7檸檬酸鹽緩沖液：取368g檸檬酸溶于600ml蒸餾水中，另取295g氫氧化鉀溶于水，再將二種溶液合并，用1N氫氧化鈉將ph調(diào)至6．7，并用水稀釋至2L。 (2)苯酚鈉溶液：稱62．5g苯酚溶于少量乙醇中，加2mI甲醇和18．5ml丙酮，然后用乙醇稀釋至100ml(A液)，保存在冰箱中。稱27g氫氧化鈉溶于100ml水中(B掖)，保存在冰箱中。使用前取A．B兩液各20ml混合，并用蒸餾水稀釋至100ml備用。 (3)次氯酸鈉溶液：用水稀釋制劑，至活性氯的濃度為0.9%，溶液穩(wěn)定。 (4)l10％尿素液。 (5)甲苯。 (6)氮的標(biāo)準(zhǔn)溶液：精確稱取0．4717g硫酸銨溶于水并稀釋至1000ml，則得1ml含0．1mg氮的標(biāo)準(zhǔn)液。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，可再將此液稀釋10倍供用。 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：吸取稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液1、3、5、7、9、11、13mI，移于50ml容量瓶中，然后加蒸餾水至20mI。再加4ml苯酚鈉镕液和3ml次氯酸鈉溶液，隨加隨搖勻。20min后顯色，定容。1h內(nèi)在分光光度計(jì)上于波長(zhǎng)578nm處比色。根據(jù)光密度值與溶液濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 2.操作步驟 取5g風(fēng)干土，置于50mI三角瓶，加1ml甲苯。15min后加10ml 10％尿素液和20ml ph6．7檸檬酸鹽緩沖液。搖勻后在37度恒溫镕中培養(yǎng)24h。過(guò)濾后取3ml濾液注入50ml容量瓶，然后按繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線顯色方法進(jìn)行比色測(cè)定。 3．計(jì)算 脲酶活性以24h后1g土壤中NH3—N的毫克數(shù)表 示。 NH3—N(mg)＝a X 2 式中 a——從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的NH3一N毫克數(shù) 2——換算成1g土的系數(shù) 轉(zhuǎn)化酶 《土壤酶及其研究法》•276．比色法 1．試劑配制 (1)3，5—二硝基水楊酸溶液；稱0．5g二硝基水楊酸，溶于20ml2N氫氧化鈉和50ml水中，再加30g酒石酸鉀鈉，用水稀釋至100ml(不超過(guò)7天)。 (2)PH5．5磷酸緩沖液：1／15M磷酸氫二鈉（11．867g 溶于1L蒸餾水中)0.5ml加1／15M磷酸二氫鉀(9．078g KH2PO4溶于1L蒸餾水中)9.5ml即成。 (3)8％蔗糖溶液。 (4)甲苯。 (5)標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液：將葡萄糖先在50-58度條件下，真空干燥至恒重。然后取500mg溶于100ml苯甲酸溶液中(5mg還原糖／ml)，即成標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液。再用標(biāo)準(zhǔn)液制成1ml含 0.01—0.5mg葡萄糖的工作溶液。 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：取1ml不同濃度的工作液，并按與測(cè)定蔗糖酶活性同樣的方法進(jìn)行顯包，比色后以光密度值為縱坐標(biāo)，葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。 2．操作步驟 稱5g風(fēng)干土，置于50ml三角瓶中，注入15ml 8％蔗镕溶液，5ml pH5．5磷酸緩沖液和5滴甲苯。搖勻混合物后，放入恒溫箱在37℃下培養(yǎng)24h。到時(shí)取出，迅速過(guò)濾。從中吸取濾液1ml，注入50ml容量瓶中，加3ml 3，5--二硝基水楊酸,并在沸騰的水浴鍋中加熱5min，隨即將容量瓶移至自來(lái)水流下冷卻3min。溶液因生成3-氨基-5-硝基水揚(yáng)酸而呈橙色，最后用蒸餾水稀釋至50ml，并在分光光度計(jì)上于波長(zhǎng)508nm處進(jìn)行比色 為了消除土壤中原有的蔗糖、葡萄糖而引起的誤差，每一土樣需做無(wú)基質(zhì)對(duì)照，整個(gè)試驗(yàn)需做無(wú)土壤對(duì)照。 3．結(jié)果計(jì)算 蔗糖酶活性以24h后1g土壤葡萄糖的毫克數(shù)表 示。 葡萄糖(毫克)=a x 4 式中 a——從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的葡萄糖毫克數(shù) 4——換算成1g土的系數(shù) 磷酸酶《土壤酶及其研究法》磷酸苯二鈉比色法P310 1．試劑配制 (1)0.5％磷酸苯二鈉(用緩沖液配制)． （2)pH5醋酸鹽緩沖液、pH7檸檬酸鹽緩沖液、 pH9．4硼酸鹽緩沖液。 (3)氯代二溴對(duì)苯醌亞胺試劑；取0．125g 2．6—二溴苯醌氯酰亞胺。用10ml 96%乙醇溶解，貯存于棕色瓶中，放在冰箱里。保存的黃色溶液末變褐色之前均可使用。 (4)酚的標(biāo)準(zhǔn)溶液： 酚原液——取1g重蒸酚溶于蒸餾水中，稀釋1L，貯于棕色瓶中。 酚工作液--取10ml酚原液稀釋至1L（每毫升含0.01mg酚）。 (5)甲苯。 (6)0．3％硫酸鋁溶液。 標(biāo)淮曲線繪制：取1，3，5，7，9，11和13ml酚工作液，置于50m[容量瓶中，每瓶加入5ml緩沖液和4滴氯代二溴對(duì)苯醌亞胺試劉，顯色后稀釋至刻度，30min后比色測(cè)定。以光密度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪成標(biāo)準(zhǔn)曲線。 2．操作步驟 稱5g風(fēng)干土置于200ml三角瓶中，加2．5mI甲苯，輕搖15min后，加入20ml 0.5％磷酸苯二鈉(酸性磷酸酶用醋酸鹽緩沖液；中性磷酸酶用檸檬酸鹽緩沖液，堿性磷酸酶用硼酸鹽緩沖液)，仔細(xì)搖勻后放入恒溫箱，在37度下培養(yǎng)24h。后于培養(yǎng)液中加100ml 0.3％硫酸鋁溶液并過(guò)濾。 吸取3ml濾液于50ml容量瓶中，然后按繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線所述方法顯色。用硼酸緩沖液時(shí)呈現(xiàn)藍(lán)色，在分光光度計(jì)上于660nm 處比色。 3．結(jié)果計(jì)算 磷酸酶活性，以24h后1g土壤中釋出的酚的毫克數(shù)表示。 酚(mg)=a×8式中 a——從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的酚毫克數(shù) 8——換算成1g土的系數(shù) |
2樓2014-04-22 18:31:41
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