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weizhe34至尊木蟲 (職業(yè)作家)
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[求助]
原核表達(dá)の不可思議的重組
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各位師兄師姐請(qǐng)幫我分析下：我做一個(gè)原核表達(dá)目的基因連在T載體上進(jìn)過英俊公司測(cè)序成功，能找到目的片段，接著雙酶切連接，酶切為雙酶切時(shí)間4h，連接16℃過夜，跳單克隆，進(jìn)過菌落pcr有目的片段的送檢，但是檢測(cè)結(jié)果出其意料，盡然為意外一個(gè)載體的T載體連接序列。 解釋：我做了兩個(gè)不同載體的原核表達(dá)，目的序列一樣，只是設(shè)計(jì)的引物前面酶切和保護(hù)堿基不同，在這次重組測(cè)序結(jié)果出來時(shí)我很奇怪的發(fā)現(xiàn)，A載體重組的序列盡然為B載體與T載體的序列，這是什么原因？之前A.B載體連在T載體上測(cè)序結(jié)果都是對(duì)的。載體提取的質(zhì)粒以及酶切都很正常。 |
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2樓2012-04-07 09:29:39
panda73
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weizhe343樓2012-04-07 11:18:06
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8樓2012-04-13 10:45:23
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