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zhang8826857鐵桿木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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[求助]
誰(shuí)做過(guò)乙醇沉淀法濃縮DNA呀？離心之后能用肉眼看到DNA嗎？
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誰(shuí)做過(guò)乙醇沉淀法濃縮DNA呀？離心之后能用肉眼看到DNA嗎？ 我是用瓊脂糖凝膠回收試劑盒回收之后的PCR產(chǎn)物，用乙醇沉淀法濃縮DNA，離心之后看不到有DNA沉淀，這咋辦呀？是本來(lái)就看不到還是沒(méi)沉淀下來(lái)？有做過(guò)的蟲(chóng)子給俺個(gè)建議呀  |
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zhang8826857: 金幣+5, ★有幫助 2012-04-08 09:55:55
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zhang8826857: 金幣+5, ★有幫助 2012-04-08 09:55:55
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這要看你DNA的量，一般PCR產(chǎn)物用酒精沉淀的話應(yīng)該能看到的 方法：PCR產(chǎn)物+2.5倍體積100%酒精+1/10體積醋酸鈉（pH=5.2），-80度沉淀30min，離心，加1ml 75%酒精洗滌，離心，再加100%酒精洗 滌。 PCR產(chǎn)物一般補(bǔ)水至100ul，酒精都用預(yù)冷的。 上海生工有專(zhuān)門(mén)的純化試劑盒，得到的量都很大 |
4樓2012-04-07 23:15:29
誰(shuí)是來(lái)遲的莞
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22樓2012-10-11 15:40:50
xmuring 
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【答案】應(yīng)助回帖
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zhang8826857: 金幣+5, ★有幫助, 感謝回帖，我就是膠回收的，但是需要極大的濃縮，所以問(wèn)乙醇沉淀的問(wèn)題呀 2012-04-07 22:11:08
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zhang8826857: 金幣+5, ★有幫助, 感謝回帖，我就是膠回收的，但是需要極大的濃縮，所以問(wèn)乙醇沉淀的問(wèn)題呀 2012-04-07 22:11:08
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我做過(guò)乙醇沉淀法濃縮DNA，但不是膠回收之后的，DNA沉淀一般是在管底的一層透明的東西，對(duì)著燈光看能看出來(lái)跟離心管的折射率不一樣。 話說(shuō)你回收PCR產(chǎn)物為什么不直接用PCR產(chǎn)物回收試劑盒呢？我用過(guò)膠回收試劑盒，回收率特別特別低，不知道是不是操作原因。。。 |
2樓2012-04-07 22:04:12
mjzjily
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3樓2012-04-07 22:34:48
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zhang88268575樓2012-04-08 00:57:10
liuyu_sdili
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【答案】應(yīng)助回帖
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zhang8826857: 金幣+5, ★有幫助 2012-04-08 09:56:08
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zhang8826857: 金幣+5, ★有幫助 2012-04-08 09:56:08
| 做過(guò)這方面實(shí)驗(yàn)，提供一點(diǎn)我的經(jīng)驗(yàn)：如果量少的話是看不見(jiàn)的，但是乙醇沉淀（最好加鹽助沉）確實(shí)可以沉淀DNA，不用擔(dān)心沉淀不下來(lái)。另外離心時(shí)離心管最好都要有一個(gè)固定的放置方式，這樣離心完后雖然看不見(jiàn)但可以知道沉淀在什么位置，從而可以避免用槍吸出乙醇時(shí)同時(shí)也將DNA吸走~~~ |
6樓2012-04-08 08:01:54
zhang8826857
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7樓2012-04-08 10:36:00
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8樓2012-04-08 11:05:07
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