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shuodanjiang金蟲 (初入文壇)
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[求助]
人體腎臟293細(xì)胞
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請問哪位大俠正在做人體腎臟293細(xì)胞的？本人正準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)有一些不明之處，還望高人多多指點(diǎn)！ 1、要用什么樣的培養(yǎng)基 2、培養(yǎng)時有沒有什么需要特殊注意的。多謝！ |
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wtyyyyy1988
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 很熱心，歡迎常來 2012-04-10 09:29:22
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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一：用DMEM培養(yǎng)基，百分之十的血清 二：它是貼壁細(xì)胞，注意消化過程，消化過度對后期生長貼壁和形態(tài)影響比較大，長了百分之八九十就要傳代咯 具體的可以看看ATCC上面寫的，祝實(shí)驗(yàn)順利！ [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
shuodanjiang
2樓2012-04-10 00:26:06
shuodanjiang
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3樓2012-04-10 10:35:25
wtyyyyy1988
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Protocol: Remove and discard culture medium. Briefly rinse the cell layer with 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA solution to remove all traces of serum that contains trypsin inhibitor. Add 2.0 to 3.0 ml of Trypsin-EDTA solution to flask and observe cells under an inverted microscope until cell layer is dispersed (usually within 5 to 15 minutes). Note: To avoid clumping do not agitate the cells by hitting or shaking the flask while waiting for the cells to detach. Cells that are difficult to detach may be placed at 37°C to facilitate dispersal. Add 6.0 to 8.0 ml of complete growth medium and aspirate cells by gently pipetting. Add appropriate aliquots of the cell suspension to new culture vessels.An inoculum of 2 X 10 (3) to 6 X 10 (3) viable cells/cm2 is recommended. Incubate cultures at 37°C.6. Subculture when cell concentration is between 6 and 7 X 10(4) cells/cm2. Subcultivation Ratio: 1:6 to 1:10 weekly Medium Renewal: Every 2 to 3 days |
4樓2012-04-10 10:59:28
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