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lydia320新蟲 (初入文壇)
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[求助]
瞬轉(zhuǎn)中，質(zhì)粒在細(xì)胞里會(huì)復(fù)制嗎？
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| 在瞬時(shí)轉(zhuǎn)染中，轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中的質(zhì)粒會(huì)隨著細(xì)胞的增值而復(fù)制增多嗎？轉(zhuǎn)染多久之后質(zhì)粒可能會(huì)降解�。繖z測(cè)質(zhì)粒表達(dá)的蛋白，在轉(zhuǎn)染后多久給藥刺激質(zhì)粒轉(zhuǎn)錄，多久后是蛋白表達(dá)的高峰呢？請(qǐng)各位高人多多指教��！ |
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 分子生物學(xué) 質(zhì)粒提取 |
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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質(zhì)粒復(fù)制與否取決于你用的瞬轉(zhuǎn)系統(tǒng)。 有兩個(gè)高表達(dá)的瞬轉(zhuǎn)系統(tǒng)是能夠保證質(zhì)粒復(fù)制的： 基于SV40病毒大T抗原的復(fù)制系統(tǒng)，如：HEK293T + 含SV40復(fù)制原點(diǎn)的質(zhì)粒系統(tǒng) 基于EBV病毒EBNA1蛋白的復(fù)制系統(tǒng)，如：HEK293E+含EBV復(fù)制原點(diǎn)的質(zhì)粒系統(tǒng) 其他的瞬轉(zhuǎn)系統(tǒng)應(yīng)該是不能復(fù)制，因而表達(dá)量低 |
lydia3205樓2012-04-11 21:05:22
Rubisco580
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
lydia320: 金幣+10, ★★★很有幫助 2012-04-11 22:56:28
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
lydia320: 金幣+10, ★★★很有幫助 2012-04-11 22:56:28
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轉(zhuǎn)細(xì)胞的質(zhì)粒是不會(huì)復(fù)制的，真核生物沒有這種機(jī)制，只有整合到基因組的才會(huì)隨著細(xì)胞增殖而復(fù)制。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染能維持一周就不錯(cuò)了。 蛋白表達(dá)嘛，要看細(xì)胞和質(zhì)粒而定了。一般情況下轉(zhuǎn)染24～48h后檢測(cè)會(huì)比較好。樓主參考文獻(xiàn)確定這個(gè)時(shí)間點(diǎn)吧。 |
2樓2012-04-11 16:40:03
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3樓2012-04-11 19:05:25
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6樓2012-04-11 23:01:58
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