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ywmwiw新蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
SDS-PAGE凝膠電泳求教 已有9人參與
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| 最近一直在跑凝膠電泳，Marker的條帶應(yīng)該有6條，可是跑了無(wú)數(shù)次都只跑出了5條，只有偶爾能跑出6條（跑出6條的機(jī)率跟中大獎(jiǎng)差不多），曾請(qǐng)教過(guò)一位師姐，得知電流太大，之后按濃縮膠（50v，28-33mA）分離膠（80v，38-43mA）跑了幾次都不成功（師姐能跑出來(lái)了），膠的各種配方和每塊膠都是本人自己配的（包括師姐跑的那次），請(qǐng)問(wèn)各位高手這是為什么呢？ |
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ixido
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
西瓜: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2012-04-26 21:50:26
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
西瓜: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2012-04-26 21:50:26
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感覺(jué)樓主跑膠條件電流也不小啊。 跑膠時(shí)間可以延長(zhǎng)一點(diǎn)，讓溴酚藍(lán)前沿跑到最底下，然后染色脫色的時(shí)候不要把溴酚藍(lán)切掉看看。有時(shí)候marker最后一條帶會(huì)和溴酚藍(lán)前沿在一起分不開(kāi)。如果還是不行的話，建議樓主改變一下分離膠的濃度。 其實(shí)，少一條沒(méi)多大關(guān)系的，只要你的目的蛋白在能看到marker的區(qū)間就行。不要太糾結(jié)了。 |
11樓2012-04-26 18:15:33
★ ★ ★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2012-04-25 13:51:34
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2012-04-25 13:51:34
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2樓2012-04-25 11:28:57
0624410024
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3樓2012-04-25 16:32:10
★ ★ ★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2012-04-26 15:52:38
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2012-04-26 15:52:38
| 同樣的問(wèn)題我也碰到過(guò)，到現(xiàn)在也是這樣，這種情況往往會(huì)以膠的底部有一條線，線，最后一條Marker就在那條線上面，染色的時(shí)候線以下什么條帶都沒(méi)有了，線以上正常染色；至于 為什么會(huì)形成那條線，我現(xiàn)在也不知道；估計(jì)是前面的蛋白都積在一起了，分不開(kāi)，可能是SDS不夠處理樣品的時(shí)候可以多加一些上樣緩沖液，在電泳緩沖液里稍微多加一些SDS看下效果 |
4樓2012-04-25 19:53:47
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