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songzi136金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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普通的液相色譜柱子C18 5微米，用來(lái)分離蛋白質(zhì)會(huì)怎么樣？ 已有17人參與
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普通的液相色譜柱子C18 5微米，用來(lái)分離蛋白質(zhì)會(huì)怎么樣？ 現(xiàn)有一個(gè)分子量7萬(wàn)左右的蛋白，我想知道普通的HPLC C18 色譜柱（5微米，非蛋白專(zhuān)用柱），因?yàn)闆](méi)錢(qián)買(mǎi)蛋白專(zhuān)用柱。 如果將含有此蛋白的溶液進(jìn)入色譜柱。 結(jié)果會(huì)是怎樣的： 1.蛋白會(huì)很快流出色譜柱？ 2.還是會(huì)留在色譜柱前面？ 3.一般的蛋白質(zhì)在5%的甲醇中會(huì)不會(huì)變性？ 4.堵柱子的可能性有多大？ |
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mikeliubao
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
soundhorizo: 金幣+3, 感謝參與~ 歡迎常來(lái)分析版~ ^^ 2012-04-28 19:40:15
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
soundhorizo: 金幣+3, 感謝參與~ 歡迎常來(lái)分析版~ ^^ 2012-04-28 19:40:15
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首先做蛋白的C18與粒徑大小關(guān)系不大，要選在孔徑大的C18柱，越大分子量需要越大的孔徑柱子。 其次，蛋白質(zhì)樣品一般不能溶解在甲醇中，要用乙腈溶解，一般蛋白質(zhì)在乙腈的溶解度比甲醇高。包括流動(dòng)相，也要用乙腈。一般還要加三氟乙酸形成離子對(duì)增加蛋白質(zhì)在C18上的保留。所以，一般C18對(duì)蛋白的保留性能差，不會(huì)被吸附在C18顆粒上，除非堵在柱頭或由于流動(dòng)相性質(zhì)改變而造成蛋白沉淀在C18顆粒之間。 還有，你用梯度程序初始狀態(tài)下的流動(dòng)相配比來(lái)溶解樣品，溶解后用高速離心機(jī)離心（4000-5000g），之后抽取中間的溶液上你現(xiàn)有C18柱試試看能不能分離，如果可以，就不用買(mǎi)柱子了。 |
7樓2012-04-28 10:25:02
lanpishu23
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