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[交流]
DNA電泳
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跑DNA電泳的親們 交流一下DNA電泳吧 謝謝了 這是我跑的電泳 用CTAB法提取 將樣品加20μl SDS和1ml預(yù)熱的CTAB提取液，在65℃下水浴1h，其每間隔5min輕輕搖晃，加入等體積的苯酚：氯仿：異戊醇=25:24:1，在漩渦混合器上震蕩混勻，10000r4℃離心10min，取上清加1ml冷凍的無水乙醇和50μl乙酸鈉（3M PH=5）-20℃冷凍1h，10000r4℃離心10min，用70%無水乙醇洗滌2次，干燥后加TE溶解，-20℃保存?zhèn)溆谩?br /> 0.8%瓊脂糖電泳 染色10min 凝膠成像 出來的圖像是這樣的 想請(qǐng)大家?guī)头治鲆幌?謝謝 [ Last edited by saliangqh on 2012-5-2 at 17:11 ] |
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chenguestc
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6樓2012-05-02 11:14:46
★
saliangqh(金幣+1): 謝謝參與
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7樓2012-05-02 14:33:59
8樓2012-05-02 15:12:59
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30樓2012-05-08 19:13:08
★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2012-05-09 14:02:53
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2012-05-09 14:02:53
| 前面的說的很對(duì)，就是RNA污染加上DNA片段降解加打斷了，看你的點(diǎn)樣孔還很亮，估計(jì)還有蛋白多糖之類的污染，混勻什么的步驟你動(dòng)作輕柔一點(diǎn)，我以前也這樣過，不過后來換了試劑盒提就沒這種問題了。在23KB處非常清晰，彌散很少。不過我提的是細(xì)菌的基因組DNA，如果樓主的老師經(jīng)費(fèi)充足的話，建議用試劑盒。。。效果好很多，對(duì)后續(xù)的一系列的實(shí)驗(yàn)都有決定性的幫助。 |
31樓2012-05-09 13:00:52
32樓2012-05-09 14:36:36
★ ★ ★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
西瓜: 金幣+4, 鼓勵(lì)交流 2012-05-09 18:52:31
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
西瓜: 金幣+4, 鼓勵(lì)交流 2012-05-09 18:52:31
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（1） 操作上：磨樣后加入裂解液可以用漩渦混合器上震蕩混勻，之后抽提過程中不可劇烈震蕩，否則DNA容易斷裂； （2） 電泳結(jié)果： 點(diǎn)樣孔很亮的，說明提取的DNA含蛋白質(zhì)等雜質(zhì)； 靠近點(diǎn)樣孔附近的稍亮的帶是DNA，下部較亮的是RNA，且降解厲害，建議提完DNA后，用1%的RNase于37℃消化RNA 2h； 檢測DNA時(shí)，注意瓊脂糖凝膠厚度不要超過0.5cm，否則影響成像效果，電壓要穩(wěn)，緩沖液盡量用新配的； |
33樓2012-05-09 17:10:45
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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從左到右應(yīng)該說6、7、8看到點(diǎn)樣孔發(fā)亮，有蛋白殘留。 1、2還是可以的。7、8也看得到單一亮帶。（這點(diǎn)想跟大家交流下，有人說基因組DNA電泳就應(yīng)該是這種彌散狀的，也有人說應(yīng)該是單一無拖尾的細(xì)條帶，哪種對(duì)吶） 所有樣品都彌散了，操作過程動(dòng)作太劇烈，DNA打碎了。 水浴1h沒有問題。（這個(gè)時(shí)間以前我們這么干過） RNA覺得跑電泳不好看就加RNA酶，不去一般不影響后續(xù)的PCR。 這種程度的DNA要求不嚴(yán)的PCR可以出結(jié)果。（3、4就不敢說了） |
34樓2012-05-09 19:57:21
35樓2012-08-24 10:07:32
簡單回復(fù)
zhixuec9樓
2012-05-02 16:56
回復(fù)
saliangqh(金幣+1): 謝謝參與[rate]saliangqh 2 16[/rate]
zhixuec18樓
2012-05-02 17:21
回復(fù)
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