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[求助]
M13噬菌體DNA提取
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求助： 1、70%乙醇洗滌，體積多少比較合適？真空干燥，沒(méi)有真空干燥設(shè)備，有沒(méi)有什么方法可以代替？ 2、離心轉(zhuǎn)速是14000rpm還是10000rpm？ 3、如果送公司測(cè)序，一般濃度多大比較好？ [ Last edited by zzl20070 on 2012-5-2 at 18:51 ] |
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3樓2012-05-03 10:36:16
yuluoqiutong
木蟲(chóng) (正式寫手)
初出茅廬
- 應(yīng)助: 14 (小學(xué)生)
- 金幣: 2279.9
- 散金: 116
- 紅花: 1
- 帖子: 319
- 在線: 70.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1737786
- 注冊(cè): 2012-04-05
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
2樓2012-05-03 09:48:41
4樓2012-05-03 17:28:59
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I 挑單克隆，搖床4.5h，200r，離心30sec后，將上清500μl 含噬 菌體上清轉(zhuǎn)入一新鮮離心管。 II 加 200μl PEG/NaCl，顛倒混勻，室溫放置 10min。 III 14000rpm 4°c離心 10min，棄上清液。 IV 短暫離心，小心吸去殘余上清。 V 沉淀物徹底重懸于 100μl 碘化物緩沖液中，加入 250μl 乙醇。室溫溫育10min。短時(shí)間的室溫溫育使單鏈?zhǔn)删w DNA 沉淀而大多數(shù)噬菌體蛋白保持在溶液中。 VI 14000rpm 4°c離心 10min，棄上清。用 70%的乙醇洗沉淀，離心12000rpm 5min 吸凈干燥（這個(gè)離心數(shù)和二樓的不一樣，你可以都試試） VII 沉淀重懸于 30μl 雙蒸水中貯存。 |
5樓2012-05-03 17:34:13
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