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求教!PAGE膠出現(xiàn)的詭異結(jié)果,加急!!
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這兩天的實驗中遇到了一個非常詭異的問題,想問問大家,有沒有遇到過類似的情況~~~ 非變性聚丙烯凝膠電泳跑出來,膠上的marker是正常的,但所有的DNA樣一點點都沒有往下走,全部在點樣口處,能看得出基本都有產(chǎn)物,就是不往下面走,可是marker又是正常的梯度,一個條帶不少,這到底是腫么回事?? 如果是斷路了,那么marker應該也不動,可就是marker正常。。 這幾天就為找原因搞得頭都大了,能換的試劑和溶液基本都換了一遍,引物也是新的,實在想不出招了 有做過這類實驗的同仁們,請賜教。。 |
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加樣孔比較亮一般5個原因,有DNA片段太大、或者蛋白質(zhì)雜質(zhì)還有一種比較少的可能DNA濃度太高(上樣量太大)、凝膠濃度太高、或者凝膠制作時未完全融化在加樣孔處阻滯了部分樣品。 聚丙烯酰胺凝膠濃度太大,DNA分子量大,進不去凝膠---跑個瓊脂糖試一試就可以;DNA樣品本身就有問題,可能就沒有DNA存在,只是一些雜質(zhì)蛋白--通過紫外分光檢測可以排除!DNA濃度過高,一般DNA溶液會很粘稠不容易吸取,在樣品加樣時就能發(fā)現(xiàn);凝膠濃度高,試一試瓊脂糖凝膠0.8%基本可以解決問題;凝膠制作問題,那你就自己反省吧! 以上所有情況本人都切身遇到過! 如果都不是,那你就想上帝禱告吧! [ Last edited by wuweibewin on 2012-5-7 at 11:25 ] |

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