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[資源]
關(guān)于DNA提取----提取動物總DNA
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1、取動物組織100mg左右于樣品管中，用干凈的剪刀將組織塊剪碎。 2、在樣品管中加入如下試劑： 500μl的STE溶液(0.1mol/L NaCl，10mmol/L pH=8.0的Tris·Cl，1mmol/L EDTA) 25 μl 蛋白酶 K（Proteinase K，10 mg／ml） 75μl 10％ SDS 3、混勻后置56℃下消化2小時以上（隔一定時間混勻一次）。 4、加人等體積的飽和酚溶液，輕輕顛倒混合5分鐘以上，用于rDNA(核糖體DNA)和RAPD(rapid amplified polymorphic DNA)分析的樣品需抽提24小時。 5、7000r／min 離心5分鐘。 6、小心將上層清液移至另一干凈的離心管中，加入等體積的苯酚及氯仿，并重復(fù)步驟4、5。 7、以等體積的氯仿（內(nèi)含1／25 體積的異戊醇）重復(fù)步驟4、5和。 8、在上清液中加入1／10體積的3mol／dm３乙酸鈉(NaAc)或 5mol／dm３乙酸銨(NH４Ac)、2 倍體積的-20度預(yù)冷的無水乙醇或1倍體積的異丙醇，以沉淀DNA。 9、-70℃下沉淀2小時或置-20℃下沉淀過夜。 10、7000r／min離心10分鐘，再以-20度預(yù)冷的70％乙醇洗滌DNA沉淀一次，將沉淀置真空干燥器或37℃溫箱中干燥。 11、以適量的TE溶液（200-500μl）溶解DNA樣品。 12、用分光光度計在260nm處測定DNA的濃度，260／280nm的光密度比值應(yīng)在1.8以上(否則提示可能有蛋白質(zhì)或苯酚的污染)。 13、以TE(溶解DNA，10mmol/L Tris-HCl，1mmol/LpH=8.0的EDTA)溶液將DNA樣品稀釋成所需的工作液的濃度。 14、取2μl左右的樣品進(jìn)行電泳檢測，以判斷DNA是否有降解以及是否需要消除RNA。 |
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2樓2011-08-11 15:31:20
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