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[求助]
巰基化后形成多多聚體
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| 請(qǐng)問各位戰(zhàn)友是否有人用過traut‘s試劑對(duì)蛋白質(zhì)或短肽巰基化，我在實(shí)驗(yàn)中利用該試劑巰基化后產(chǎn)生多聚體而不溶于水，請(qǐng)問是否應(yīng)該加入DTT保護(hù)生成的巰基？應(yīng)該什么時(shí)候加入？加入的DTT是否會(huì)與traut's試劑反應(yīng)？ |
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凌波麗
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
ppares: 金幣+1, ★★★很有幫助 2012-05-14 23:05:08
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Traut’s試劑（Traut’s Reagent） 修飾伯胺產(chǎn)生巰基基團(tuán)。 特點(diǎn) • 在pH7-9條件下與伯胺（賴氨酸ε氨基基團(tuán)）反應(yīng) • 在巰基基團(tuán)上添加短間隔末梢，可以作為巰基特異性交聯(lián)或標(biāo)記的靶點(diǎn)應(yīng)用 • 含胺的間隔臂保存了最初被修飾的伯胺的電荷。 有副反應(yīng)是肯定的，不過可以想法避開。首先在最適合的pH7-9條件下與伯胺（賴氨酸ε氨基基團(tuán)）反應(yīng)，修飾蛋白質(zhì)的賴氨酸ε氨基基團(tuán)； 其次加大Traut’s試劑的用量，比如與蛋白質(zhì)的物質(zhì)的量形成100:1； 反應(yīng)之后用蛋白質(zhì)分離方法，比如層析、離心等去掉多聚體或者分離出單體即可。 如果用DTT，會(huì)打開蛋白質(zhì)的二硫鍵，這對(duì)修飾伯胺產(chǎn)生巰基基團(tuán)可能有產(chǎn)物抑制作用，另外，打開蛋白質(zhì)的二硫鍵，可能會(huì)暴露一些其內(nèi)部的參與形成離子鍵或者在活性中心的賴氨酸側(cè)鏈的ε氨基基團(tuán)，形成新的修飾位點(diǎn)，引起蛋白質(zhì)構(gòu)想改變，進(jìn)而影響蛋白質(zhì)的功能，如果你的目的只是修飾蛋白質(zhì)分子表面的的賴氨酸側(cè)鏈的ε氨基基團(tuán)的話。所以不建議使用DTT。 |
2樓2012-05-09 21:58:30
凌波麗
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7樓2016-03-20 17:38:01
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8樓2022-06-16 16:00:20
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