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風(fēng)逝zhilv金蟲 (正式寫手)
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[交流]
RT-PCR 已有2人參與
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為保證RNA定量的準(zhǔn)確性，如何確定用于逆轉(zhuǎn)錄的RNA的量？什么時(shí)候要稀釋模板？稀釋的倍數(shù)如何確定？？ 在某處看到逆轉(zhuǎn)錄時(shí) "RNA的體積要小于等于逆轉(zhuǎn)錄體系的1/10" 請(qǐng)問這是什么意思啊，不是一般都是25μL的體系里加5μL的RNA么？ 求解！��！ |
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孫啟亮
金蟲 (著名寫手)
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
西瓜: 金幣+2, Good！ 2012-05-12 23:14:28
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
西瓜: 金幣+2, Good！ 2012-05-12 23:14:28
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我們一般在反轉(zhuǎn)錄體系里面加入1微克的RNA。稀釋模板的原因是反轉(zhuǎn)錄試劑可能會(huì)對(duì)PCR的酶活性有抑制作用，稀釋倍數(shù)好像無明確規(guī)定，稀釋的結(jié)果是使你的目的基因擴(kuò)增更容易。RNA的體積問題，你看到的這個(gè)問題應(yīng)該是對(duì)熒光定量PCR的要求，因?yàn)槟阕龅氖瞧胀≒CR，所以不必在意。 個(gè)人能力有限，可能有錯(cuò)誤的地方請(qǐng)高手指正。 |
2樓2012-05-10 15:11:17
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3樓2012-05-12 22:49:54
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