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geniusrkx鐵桿木蟲(chóng) (小有名氣)
才蟲(chóng)
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[求助]
sybrgreen I 和sybrgreen Ⅱ 有什么區(qū)別呢？
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| 我做的是底棲動(dòng)物的DNA，想做一下瓊脂糖凝膠電泳，因?yàn)榭紤]到EB的毒性，所以換成了sybrgreen I染料，聽(tīng)說(shuō)sybrgreen I 是雙鏈的，sybrgreen Ⅱ 是單鏈的，不知道會(huì)不會(huì)對(duì)我的實(shí)驗(yàn)有影響。 |
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xmuring 
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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2樓2012-05-18 20:10:21
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3樓2012-05-18 20:15:11
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SYBR Green I 染料是一種直接與雙鏈 DNA (dsDNA) 結(jié)合的熒光染料，是熒光定量 PCR 最常用的 DNA 結(jié)合染料。在定量 PCR 中，SYBR Green I 可與雙鏈 DNA（dsDNA）非特異性 結(jié)合后發(fā)出熒光，則可以通過(guò)檢測(cè)反應(yīng)體系中的 SYBR Green I 熒光強(qiáng)度，達(dá)到檢測(cè) PCR 產(chǎn) 物擴(kuò)增量的目的。游離狀態(tài)下，SYBR Green I 發(fā)出微弱的熒光，一旦與 dsDNA 結(jié)合，其熒 光增加 1000 倍，一個(gè)反應(yīng)發(fā)出的全部熒光信號(hào)與出現(xiàn)的 dsDNA 量成比例，且會(huì)隨擴(kuò)增產(chǎn) 物的增加而增加；所以通過(guò)檢測(cè) PCR 反應(yīng)液中的熒光信號(hào)強(qiáng)度，可以對(duì)目的基因進(jìn)行準(zhǔn)確 定量，同時(shí)還可以測(cè)定擴(kuò)增的目的 DNA 片段的熔解溫度。們實(shí)驗(yàn)室用BIODAI測(cè)得的擴(kuò)增曲線起跳值一般在30左右，每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣我們就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 |
4樓2020-04-21 14:17:15
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