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lilihuang1125

金蟲 (初入文壇)

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[求助] 做過(guò)P450的請(qǐng)進(jìn)，求幫助已有1人參與

目前做一個(gè)植物P450的體外反應(yīng)，即把P450基因通過(guò)酵母異源表達(dá)后，提取微粒體，然后在磷酸鉀Buffer中，把底物，微粒體和NADPH一起孵育，一直得不到產(chǎn)物，也嘗試過(guò)用破碎酵母的總蛋白直接孵育，也以失敗告終，不知道哪步出了問(wèn)題。
基因應(yīng)該沒(méi)有問(wèn)題，因?yàn)橥瑫r(shí)做的體內(nèi)試驗(yàn)得到了產(chǎn)物。
急，請(qǐng)有經(jīng)驗(yàn)的同學(xué)賜教�。�！

[ Last edited by lilihuang1125 on 2012-5-17 at 10:14 ]

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1樓 2012-05-17 09:31:19

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lilihuang1125

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2樓: Originally posted by yunshenglmm at 2014-08-02 00:18:01
遇到同樣的問(wèn)題，痛苦！不知樓主現(xiàn)在做的如何？求幫助

你好，我已經(jīng)做完了，你可以參考一下我的文章，
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubm ... Catharanthus+roseus

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4樓2014-08-05 01:32:56

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yunshenglmm

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遇到同樣的問(wèn)題，痛苦！不知樓主現(xiàn)在做的如何？求幫助

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2樓2014-08-02 00:18:01

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bio_sci

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★
kx444555: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2014-08-03 07:57:48

建議首先確定，重組蛋白有表達(dá)嗎？光SDS-PAGE電泳不能完全確定，最好是WB再做一下

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3樓2014-08-02 12:07:50

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引用回帖:

4樓: Originally posted by lilihuang1125 at 2014-08-05 01:32:56
你好，我已經(jīng)做完了，你可以參考一下我的文章，
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Molecular+characterization+of+the+pentacyclic+triterpenoid+biosynthetic+pathway+in+Catharanthus+roseus...

謝謝樓主，仔細(xì)看了一下樓主文章，有兩個(gè)問(wèn)題想咨詢一下：
1. 樓主為何用粗酶液做酶活，而沒(méi)有提取酵母微粒體？樓主能否在酵母微粒體提取方面給我點(diǎn)建議，我這邊做了N次酵母微粒體提取，都檢測(cè)不到活性
2. 體外反應(yīng)為何6h，看了好多文章都是30min搞定

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5樓2014-08-06 20:52:05

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普通表情龍兔虎貓

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