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[交流]
就要被蛋白質(zhì)電泳（SDS-PAGE）滅了，有圖有真相，望高手指點(diǎn) 已有21人參與
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我的分離膠濃度為12，實(shí)驗(yàn)室其他人和我同時(shí)跑都能跑出清晰的條帶。 marker和樣品的量均為10微升。 左邊兩個(gè)是我的樣，右邊依次是marker、同學(xué)的樣。我?guī)捉?jīng)跑很多次了，每次都這樣，這不是偶然，而是必然啊 我用細(xì)菌胞外產(chǎn)物跑PAGE，要不是沒有條帶，要不就是模糊的條帶，maker和樣品的泳道挨著就會被及變形，樣品的泳道很寬，差不多是兩個(gè)用到那么寬。用考馬斯亮藍(lán)測定蛋白質(zhì)含量為1.78mg/ml。在電泳時(shí)會看到有黃色物質(zhì)從樣品泳道中析出。請各位高手指點(diǎn)迷津，小女子不勝感激�。。。�！  |
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2樓2012-05-17 19:44:30
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colorfulmiao
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zhaohq1209: 金幣+4, 鼓勵(lì)交流哈~高手初現(xiàn) 2012-05-18 08:42:44
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zhaohq1209: 金幣+4, 鼓勵(lì)交流哈~高手初現(xiàn) 2012-05-18 08:42:44
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黃色物質(zhì)有可能是PH值不對啊，一般情況下用TCA即三氯乙酸濃縮后的蛋白，如果不用丙酮洗滌除去TCA殘留，在加2倍或5倍SDS上樣緩沖液前，不加一定量的NaOH中和TCA的話，用SDS樣品處理液處理后的蛋白樣品在上樣前是黃色的。還有如果自己配置的SDS上樣緩沖液，如果PH值偏低也是顯示有點(diǎn)黃色。但是以我們的經(jīng)驗(yàn)來看，樣品PH值稍微偏低基本不影響跑樣。另外TCA法濃縮蛋白跑PAGE還是很漂亮的。 還有，我們實(shí)驗(yàn)室曾經(jīng)有表達(dá)的很多上清蛋白在經(jīng)PBS透析后經(jīng)PEG8000濃縮，測定蛋白樣品也挺大，但是跑蛋白膠就是像樓主似的模糊一片。懷疑是PEG8000的問題影響跑樣。后改為TCA濃縮后大部分解決了這一問題。但是有的蛋白用硫酸銨濃縮后跑樣還是有時(shí)候呈現(xiàn)模糊一片。僅限于個(gè)別蛋白，猜測可能與蛋白表達(dá)量低等有關(guān)。 |
6樓2012-05-17 22:41:25
stone856
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9樓2012-05-18 09:30:43
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10樓2012-05-18 10:02:34
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