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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 醫(yī)學 » 基礎 » PAMAM傳遞DNA原理
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PAMAM傳遞DNA原理
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由于PAMAM樹狀化合物帶有正電荷，而DNA帶有負荷，所以在溶液中通過靜電作用的方式PAMAM與DNA形成復合物。當樹狀化合物與DNA分子的比例適當時，這個復合物表面帶有正電荷，它可以和細胞膜表面上帶有負電荷的糖蛋白與磷脂相互作用，通過細胞膜進入胞內體和溶酶體，再經溶酶體或胞內體進入細胞溶質，之后進入細胞核內進行翻譯與表達。復合物進入細胞溶質的效率與復合物表面帶電荷的多少在一定范圍內正相關，進入效率取決于復合物與細胞膜的相互作用。在隨后的研究中，通過用放射性同位素標記DNA或樹狀化合物，加入疊氮化鈉，抑制細胞新陳代謝，發(fā)現可以阻止復合物進入細胞，這說明復合物進入細胞是一個主動運輸過程。隨后發(fā)現當加入細胞胞吞阻斷劑(如細胞松弛素b或脫氧葡萄糖)能在各種細胞中降低復合。酸性環(huán)境可以使DNA發(fā)生降解。帶有DNA的胞內體形成溶酶體后，溶酶體內的多種酶可以降解DNA。有人為了增加轉染效率，防止DNA被降解，加入氯喹輔助轉染，取得了一定的效果。這是因為氯喹能抑制胞內體與溶酶體的酸化。而且當PH值升高時，溶酶體內的大多數酶失活�？赡苁欠种畹牡年栯x子化合物具有質子胺組(protonable amine groups)，這種胺組具有弱堿性，可以保護DNA不被酸降解，減弱各種溶酶體酶活性，并且擾亂細胞膜系統，使復合物被從溶酶體或胞內體中釋放到胞質溶膠中。當復合物被釋放到胞內溶膠后，隨后進入核膜內，進行翻譯與表達。 PAMAM與帶有負電的DNA形成復合物，在一定DNA濃度下形成的復合物是納米級的，所以PAMAM]DNA分子被稱為PAMAM]DNA納米粒。Baker等人發(fā)現當DNA濃度較高時，PAMAM／DNA復合物可能聚集形成微米級的顆粒。Baker等通過蔗糖梯度離心，發(fā)現那些可溶的、低密度的復合物轉染了90％的細胞，而這些復合物僅占形成復合物總數的20％左右。 |
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