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kedafy新蟲 (小有名氣)
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[求助]
滾環(huán)擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)條件 已有1人參與
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最近做一個(gè)最基本的滾環(huán)擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)，不知道為什么沒有現(xiàn)象，請(qǐng)高手指點(diǎn)一二。 circle DNA是寶生物公司合成環(huán)化好的，primer DNA是一段16-mer的序列。我的實(shí)驗(yàn)條件如下：1、1.5µL circle DNA(0.05 µM)與1.5 µL primer（0.5 µM）和6.0 µL DDW混合加熱至55度后緩慢降溫至37度，保持1 h。 2、在上述溶液中加入1 µL phi29 DNA polymerase （10 u/µL）, 2 µL 聚合酶自帶buffer，3 µL dNTP，37度反應(yīng)1 h。 3、加熱至65度反應(yīng)10 min，使酶失活。 我的實(shí)驗(yàn)條件存在什么重大問題嗎？ |
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kedafy
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5樓2016-06-29 11:19:33
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