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752083371新蟲 (初入文壇)
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[交流]
AFLP，聚丙烯酰胺膠電泳，總是出問題 已有10人參與
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為什么跑的條帶是弧形的，而且總是中間顯影的時(shí)候總是偏白或者條帶出現(xiàn)斷帶，顯影不一致，就是有的地方已經(jīng)很黑了，而有的地方還不明顯，上的樣是沒有問題的，經(jīng)過瓊脂糖電泳檢測過。這幾天總是這樣，頭疼了。。。。 電泳膠配方：50ml的4.5％聚丙烯酰胺膠， 250ml的過硫酸銨，70微升的TEMD. 4.5％聚丙烯酰胺膠：40％的聚丙烯酰胺膠 113ml， 10× TBE Buffer50ml， 尿素420.42g |
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xiaoxiong520
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（1）按你的用量電泳膠配方應(yīng)該是：50ml的4.5％聚丙烯酰胺膠， 250ul的過硫酸銨，50ul的TEMD.（我們實(shí)驗(yàn)室是按這個(gè)比例混合的）；TEMED加大量會(huì)加速凝，但是凝的速度過快膠會(huì)不勻，影響跑膠的質(zhì)量。APS一般現(xiàn)配最好。 梳子帶水也會(huì)影響梳子附近膠的凝固的。在倒膠之前要好好的混勻，劇烈一點(diǎn)都沒有關(guān)系，一定一定要混勻。 （2）顯影不均勻，可能也與膠有關(guān)系，灌膠不均勻；銀染時(shí)硝酸銀一定要完全溶解； |
2樓2012-05-26 17:43:20
3樓2012-05-28 21:25:54
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4樓2012-05-29 16:38:16
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