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松松一號(hào)木蟲 (正式寫手)
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[求助]
克隆真菌的未知基因一定需要cDNA嗎
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最近在看一些文獻(xiàn)，克隆真菌的未知基因時(shí)一般都是先提RNA，在反轉(zhuǎn)錄成cDNA，然后以cDNA為模版，設(shè)計(jì)引物PCR。 也有部分是提取基因組DNA作為模版，設(shè)計(jì)引物PCR，想問(wèn)一下這兩種有什么區(qū)別，或者哪個(gè)是正確的？ 謝謝。 |
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3樓2015-11-01 23:35:17
liuyu_sdili
木蟲 (正式寫手)
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這個(gè)需要具體情況具體分析，我克隆過(guò)黑曲霉葡萄糖氧化酶的基因，NCBI上的這個(gè)基因都沒(méi)有內(nèi)含子，所以我直接用基因組P，P出來(lái)測(cè)序也沒(méi)有內(nèi)含子，但我對(duì)面的那位做青霉的半乳糖苷酶，NCBI上的序列有六七個(gè)內(nèi)含子，所以她的就比較麻煩~~~ 你的基因要是從沒(méi)人做過(guò)，那還是老老實(shí)實(shí)做反轉(zhuǎn)錄吧~~~ |
2樓2012-06-01 17:21:26
zhangyao7255
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4樓2015-11-01 23:46:02
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