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hit_yanglab新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助：植物蛋白SDS-PAGE跑膠問題
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求助各位老師同學(xué)~ 做植物蛋白的SDS-PAGE，膠跑的特別慢，上次跑了7個(gè)多小時(shí)還沒跑到底，這次又很慢，平均一小時(shí)能跑不到1cm的樣子，請(qǐng)教各位這樣正常么？有可能是啥原因�。可蠘忧凹觢oading buffer煮5min，配膠用的是碧云天的SDS-PAGE凝膠配置試劑盒，產(chǎn)品編號(hào)P0012A。 小女紙這廂有禮了~ |
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5樓2012-06-08 11:30:02
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【答案】應(yīng)助回帖
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SDS電泳太慢的改進(jìn)措施 建議改進(jìn)措施: 1.可以適當(dāng)進(jìn)一步地拉開濃縮膠和分離膠之間的pH值，比如濃縮膠為pH=6.6，分離膠為pH=8.9。 2.可以考慮加高電泳時(shí)，濃縮膠的電壓為90-100 V，分離膠的電壓到120V-200V，；濃縮膠和分離膠有時(shí)候可能都設(shè)成150 V也能電泳成功。 3.使用全新配置的緩沖溶液，以利于蛋白質(zhì)樣品的充分溶解。 4.適當(dāng)該種膠濃度下使用分離效果明顯的Marker。 5.保持各種蛋白質(zhì)樣品和Marker在上樣前能夠充分溶解，上樣前最好離心一下，實(shí)在溶解不掉的顆粒就去掉。 6.適當(dāng)調(diào)整聚丙烯酰胺的凝膠濃度。 7. 聚丙烯酰胺的充分聚合，可提高凝膠的分辨率。建議做法：待凝膠在室溫凝固后，可在室溫下放置一段時(shí)間使用。忌即配即用或4度冰箱放置，前者易導(dǎo)致凝固不充分，后者可導(dǎo)致SDS結(jié)晶。一般凝膠可在室溫下保存4天，SDS可水解聚丙烯酰胺。 8.分離膠的濃度應(yīng)高于濃縮膠，但是膠濃度高會(huì)引起電泳時(shí)間變長(zhǎng)，電泳時(shí)間會(huì)引起電泳帶彌散。具體的參考的凝膠濃度參見附錄。 5 36—200 7.5 24—200 10 14—200 12.5 14—100 15 14—60 濃縮膠濃度低；分離膠濃度高于濃縮膠，一般不小于5%。 2KD的蛋白質(zhì)必須要用Tricine膠系統(tǒng)，上面說的改進(jìn)對(duì)于分子量低于3KD的蛋白質(zhì)的電泳沒有用，但是對(duì)于高于3KD的蛋白質(zhì)的電泳有用。 |
8樓2013-10-07 22:11:15
9樓2013-10-08 10:45:46
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