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weiguo2889木蟲 (小有名氣)
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[求助]
大家?guī)臀铱纯窗。易龅拿盖蟹磻?yīng)到底是怎么回事呢？急急急！
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這是我酶切的電泳圖，用的是全基因組DNA，反應(yīng)體系如下（體系是參考別人的）：我想得到的是200-1000bp左右的片段 Genomic DNA 20μl (5-6μg) 10×enzyme buffer 5μl (終濃度1×) Sau3AI 2μl（10U/μl） ddH2O 23μl Total Volume 50μl 然后 37℃酶切2-3hr，結(jié)果就是這樣了，這是我沒純化的總DNA做的，我純化后做的更是一點(diǎn)條帶都沒有，到底是怎么回事��？ |
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| DNA全都降解了。先確認(rèn)一下是不是DNA本身已經(jīng)降解，再看看內(nèi)切酶或反應(yīng)體系有沒有問題。 |
weiguo2889
2樓2012-06-07 11:52:07
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| 你的這個(gè)結(jié)果好像是酶切出來。建議首先檢測DNA，然后用不存在講解問題的再做一下，還有在考慮是不是酶的添加量有問題 |
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4樓2012-06-07 14:04:42
weiguo2889
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| 建議酶切之前GDNA進(jìn)行純化，另外酶切時(shí)間弄到3小時(shí)以上，生工的酶是進(jìn)口分裝的，他們的說明書 很粗糙，用的時(shí)候打了很多電話。 |
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7樓2012-06-08 07:19:44
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建議如下： 1、應(yīng)該加一個(gè)沒有酶切的基因組DNA樣品； 2、Sau3AI 是四堿基識(shí)別內(nèi)切酶，所以理論上256bp就有一個(gè)酶切位點(diǎn)。部分酶切的時(shí)候酶量及酶切時(shí)間要優(yōu)化。 |
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8樓2012-06-08 14:55:37
weiguo2889
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9樓2012-06-09 00:44:16
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10樓2012-06-09 00:44:36
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